生物样品分析前处理.pptxVIP

生物样品分析;一、概述;（二）生物样品

生物样品分析的对象是体液、器官、组织及排泄物等;生物样品的介质组成比较复杂：高分子蛋白质和低分子糖、脂肪、尿素等有机物，Na+、K+、X-等无机物;体内药物存在形式：

游离型——原型药物、代谢物；

药物与蛋白质的结合物——主要与白蛋白、糖蛋白、脂蛋白结合，通过范德华力、氢键、静电力结合，非特异性结合，可逆过程，动态过程；;缀合物——药物经代谢后，极性增强，与内源性物质结合，发生缀合反应，共价键结合，不可逆。与葡萄糖醛酸结合—葡萄糖醛酸苷，与硫酸形成硫酸酯缀合物。

;（三）生物药物分析的特点

1.样品成分复杂，干扰物质多，大多需要经过分离、浓集后才能进行测定——预处理

2.样品的药物浓度低，对分析方法的灵敏度有较高的要求——灵敏度高;3.样品量少，且多数需在特定条件下采集，不易重新获得——细心操作

4.数据重现性较差——误差大

5.方法的探索性，在不断发展与完善中——创新;二、常用样品的种类、采集和贮藏;（一）血液;2.全血、血浆及血清的制备;血清一般占全血量的40%左右;3.应用

血浆（plasma）和血清（serum）是最常用的生物样品。;血样采集后应及时分离血浆或血清，最好马上分析；

短期保存时应置于冰箱冷藏室（4℃）中;

长期保存时应置于冰箱冷冻室

（-20℃）中。;（二）唾液;（三）尿液;尿药测定主要用于药物剂量回收研究，尿清除率、生物利用度的研究，或药物代谢类型的确定。

;尿样的采集;尿样的保存;三、生物样品分析前处理技术;2.被测药物的性质

结构、药理性质等;（2）色谱法参比方法

HPLC、GC、GC—MS、HPLC—MS;（3）免疫分析法有时作为参比方法

放射免疫分析法（RIA）

酶免疫分析法（EIA）

荧光免疫分析法（FIA）;（二）去除蛋白质;2.加入中性盐;3.加入强酸

;4.加入含锌盐及铜盐的沉淀剂

常用的沉淀剂：CuSO4-NaWO4

ZnSO4-NaOH

;5.酶解法

优点：适用于测定酸不稳定及蛋白结合??固的药物。

缺点：不适用于在碱性下易水解的药物。

最常用的酶是蛋白水解酶中的枯草菌溶素;（三）缀合物的水解;（四）分离、纯化与浓集;1.液—液提取法;（1）常用萃取溶剂及萃取方法;③提取的pH多数生物样品在碱性下提取；当一些碱性药物在碱性条件下不稳定时，则在近中性pH用氯仿和异丙醇提取；中性药物在pH7附近提取。;（2）优点

（3）缺点

（4）离子对提取法;2.液-固提取法（LSE）;将具有吸附、分配及离子交换性质的、表面积大的担体作为萃取剂填入小柱，以溶剂淋洗后，将生物样品通过，使药物或杂质保留在担体上，用适当溶剂洗去杂质，再用适当溶剂将药物洗脱下来。;常用担体可分为两类：

第一类为亲水性的硅藻土，可以吸附、捕集不同极性的药物，然后用与水不混溶的有机溶剂洗脱。

第二类常用疏水性的活性炭、聚苯乙烯或化学键合相等，可吸附亲脂性药物，然后用有机溶剂分离。;优点：

1.引入杂质少

2.提取效率高，可用少量生物样品进行分析

3.不会形成乳化现象

3.处理样品速度快

4.安全、价廉

5.萃取操作可在室温进行，适于处理挥发性及对热不稳定的药物。;3.被测组分的浓集;（2）挥去提取溶剂法

氮气流吹干法：适用于不易挥发的药物

减压法：适用于易挥发或遇热不稳定的药物;（五）化学衍生化;能被衍生化的基团：

药物分子中含活泼H者均可被化学衍生化，如含有-COOH、-OH、-NH2、，-NH-、-SH等官能团的药物;GC中的化学衍生化法

极性基团→极性小、易挥发的药物

主要的衍生化反应：烷基化，酰化，硅烷化;HPLC中化学衍生化

目的主要是提高药物的检测灵敏度。

;四、生物药物分析方法验证;附录《药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则》规定相对回收率一般应在85～115%范围内，在LOQ附近应在80～120%范围内。;药物提