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植物组织培养母液的配制与保存

植物组织培养母液的配制与保存

目的

熟练掌握植物组织培养中各种成分或成分组的母液（比需要量大若干倍）的配制方法。

实验仪器

电子天平（感量为0.0001g）、一般天平（感量为0.1g）、烧杯100mL50mL25mL）、量筒（1000mL100mL50mL）、容量瓶200mL100mL50mL25mL）、细口瓶（500mL200mL100mL50mL）、药勺、玻棒、电炉等。

实验试剂

?按培养基配方准备

实验原理

一）培养基的组成

培养基是植物组织培养中的“血液”，血液的成分及其供应状况直接关系到培养物的生长与分化，因此了解培养基的成分、特点及其配制至关重要。自然状态下生长的绿色植物由于自身能进行光合作用，并且能合成植物生长发育所需的几乎所有有机成分，加上土壤中含有较全面的无机和有机营养成分，所以只需在适当的时候施加少量的无机和有机肥（复合成分），植物就可良好的生长。目前所使用的培养基有10余种之多，大部分都是在前人研究的基础上经过分析综合和改进而成的。例如，White培养基是Uspenski和Uspenskaia（1925）的藻类培养基演化的结果，被广泛用于根的培养；Cautheret培养基是建立在Knop营养液(1865)基础上的。以后的培养基大部分是在White和Cautheret培养基的基础上改进而成。

就目前所使用的各种培养基而言，可将它们的成分划分为几大类，常用的有MS、B5、和White培养基等。

1．水水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。?

2．无机营养成分：

依次分别称取：

???NH4NO3????16.5g?????

???KNO3?????19.0g??????

KH2PO4????1.70g

MgSO4·7H2O??3.7g

CaCl2·2H2O??4.4g

共配成1L的母液。倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。

二）MS微量元素母液的配制

一般将微量元素配制成100倍母液。依次称取：

KI????????0.083g????

Na2MoO4·2H2O???0.025g

H3BO3??????0.62g????

CuSO4·5H2O????0.0025g

MnSO4·H2O???1.69g?????

CoCl2·6H2O????0.0025g

ZnSO4·7H2O???0.86g

配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。

CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。

分别称取

CuSO4·5H2O????0.05g????CoCl2·6H2O??0.05g

各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。

三）MS有机质母液的配制

???一般配制成100倍MS有机母液。

依次称取

肌醇?10g????盐酸硫胺素（VB1）0.01g

烟酸?0.05g???甘氨酸???0.2g

盐酸吡哆醇（VB6）??0.05g

配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。

四）MS铁盐母液的配制

一般配制成100倍MS铁盐母液。依次称取：EDTA二钠3.73g和FeSO4·7H2O2.78g，配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。

?所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐母液，共8种母液。

五）几种生长调节物质的配制

?各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解，细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。一般取100mg配成100ml母液。

?母液的保存：一般将以上配制好的各种母液保存在4℃左右冰箱内。

注意事项

1.???称量要精确

2.???配制母液时要注意药品溶解的先后顺序，以免发生化学反应，使的产生沉淀。

附：MS培养基母液的配制与保存

仪器与用具

1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱等。

2、用具：烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签等。

3、试剂：95%酒精，0.1-1NaOH，0.1