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AgilentLC色谱及色谱柱疑难解答

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出现倒峰的原因：

1.常为溶剂峰,流动相的紫外吸收大于样品的溶剂的紫外吸收,就产生倒峰.

2.样品中的杂质没有紫处吸收或吸收很小,而流动相紫外吸收大,如用甲醇时波长设定在

220nm以下时,常出现这种现象.

3.进样过程中进入了空气也会导致的.

4.如果流动相有紫外吸收的杂质，使用紫外检测器时，会产生倒峰，必须用高纯度的溶剂

作为流动相。

5.检测器的极性接反了，也会出现倒峰。

第一，用的是什么检测器？如果是示差折光，那很正常；

第二，倒峰在什么位置？如果是溶剂峰，也很正常，要去除的话，溶剂改用流动相；

第三，如果是紫外检测器（MWD,ORDAD）,有没有加参比波长？如果有，去掉参比波长

或另选合适的参比波长；

第四，如果是紫外检测器，流量池里是否有气泡产生？1.抽滤或超声去除流动相里的气泡；

2.检查在线脱气机（如果有的话）；3.调节背压；

第五，流动相是否在该波长（用紫外检测器的话）有较大的背景？1.检查你用的溶剂的等

级；2.检查色谱条件的合理性。

我认为是参比波长设置的问题，试着换个参比波长看看

多半是因为样品的ＰＨ值与流动相的ＰＨ值不一致造成的，解决办法：加大盐的浓度，用

流动相溶解样品即可．

流动相背景吸收波长低于检测波长

1.组分的吸收小于流动相的背景吸收，可能原因是流动相中加入截止波长较大的成

分或波长选择不合适

2.二极管阵列检测器中参比波长处吸收大于组分吸收；

１、首先确定是还是柱还是检测器的问题：换下柱看是否仍存在倒峰，如果不行再

换检测器，以确定是否检测器或者柱的问题。或者什么都不要换单纯换个其他化学成分，

看是否是因为你的样品存在问题。

2、如果都做了，还是不行，就考虑是否流动相问题，一般DAD存在有规律倒峰的现象还

真的不是很好解释，看您意思好象是倒峰只是跟着你的主成分走，这样你可以首先进个空

白溶剂样品，看是否还有倒峰存在，如果空白样品没有倒峰那么就是你样品问题，是否你

样品处理的有问题，

一般液相对流动相的PH控制在大概2.5-7.5范围，如果过酸或过碱会导致填料被破坏引起

成分在柱上的洗拖保留发生变化而导致规律倒峰出现也有可能，测下您的流动相PH以保

证这个没问题。样品中残留的一点酸或碱应该没问题，因为酸碱在柱上基本没有保留，且

量小应该没影响

倒峰的出现，我个人认为是色谱柱的残余硅羟基所致，同一个色谱条件，我曾经分别用非

端基封尾柱和端基封尾柱考察，前者即便是进流动相也会出现负峰，后者则没有，推断应

为残余硅羟基对进样样品中的部分离子造成吸附，使进样部分的液体与流动相产生差异，

由于溶质离子经过检测器时，紫外吸收信号减小，所以形成负方向的色谱峰。

1.样品引入

2.样品与流动相反应所致

3.检测条件不合适,建议换二极管阵列查找

4.外部引入的污染

最后一点几率很小,但也会存在的,就是仪器设备的系统误差

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如何避免基线飘移？

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基线向上飘移表明系统中有污染。请冲洗色谱柱，净化样品，然

后使用新溶剂。向下飘移通常是由于检测室或柱箱中的温度波

动的原因。减小室温变化，将仪器从通风橱中取出，并将色谱柱

和毛细管保温隔热。向下飘移也可能由于溶剂的纯度不是

HPLC级别的溶剂而且此纯度低的溶剂在紫外有吸收。

如何减少基线噪音？

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无规律噪音可能与污染有关。请冲洗色谱柱，对样品做合适的前

处理以避免污染，并使用HPLC级别的溶剂。连续噪音有可

能由检测器或泵造成。要确定问题是否发生在检测器还是在泵，

请先关泵停掉流量，监测基线。如果此时基线平稳，则噪音可能

与泵有关系。使用ChemStation在线诊断或LC手持控制器检

查泵方面的故障。如果停泵后噪音继续存在，则说明噪音与检测

器有关。首先，请尝试更换灯。如果问题依然存在，则请与安捷

伦科技公司联系。在中国，请拨打8008203278。

什么原因导致基线毛刺？

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这很有可能是流动池内有气泡。请先停泵来