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抽提方法
材料和仪器：
1DNeasyBloodTissueKit(50)，QIAGENCatNo.69504
2RNaseA,QIAGENCatNo.19101
3Eppendor离心机，型号：5415D
步骤
1组织
1.1切取25mg组织，将其放置于1.5ml离心管中，加入180μlBufferATL。
将样本编号标记在对应的管上。
1.2加20μl蛋白酶K，振荡混匀，放置56℃恒温混合仪中，间隔一定的时
间振荡一次。
1.3待组织彻底溶解后，加入4μlRNaseA（100mg/ml），振荡混匀，室温
放置2min，振荡15s，加入200μlBufferAL到样品中，振荡混匀。继
续步骤3。
2血液：
1.4无核细胞：加20μl蛋白酶K到1.5ml离心管中，加50-100μl抗凝血，
用PBS调节体积至220μl
1.5有核细胞：加20μl蛋白酶K到1.5ml离心管中，加5-10μl抗凝血，用
PBS调节体积至220μl
1.6培养细胞：300xg离心3min收集细胞（5x106），用200μlPBS悬浮
细胞，加20μl蛋白酶Ｋ
1.7加入4μlRNaseA（100mg/ml），振荡混匀，室温放置2min后，加200μl
BufferAL，振荡混匀，56℃恒温放置10min。继续抽提步骤3。
3加入200μl无水乙醇，振荡混匀。
4将步骤4.3的混合液（包括沉淀）全部加入到DNeasyMinispincolumn中。
≥6,000xg(8,000rpm)离心1分钟，舍弃流过液体和收集管。
5将柱子放置在一个新的离心收集管中，加500μlBufferAW1，≥6,000xg(8,000
rpm)离心1分钟，舍弃流过液体和收集管。
6将柱子放置在一个新的离心收集管中，加500μlBufferAW2，16,100xg
(13,200rpm)离心3分钟，舍弃流过液体和收集管。
7将柱子置入一新的1.5ml离心管中，加200μlBufferAE到柱中的膜上，室温
放置1min，离心≥6,000xg(8,000rpm)1min洗脱。
8如需获得最大的得率，可重复操作步骤7。
9定量与质检。
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