十九章药物化学基础.pptxVIP

第十九章药物研究的生物化学基础第一节生物药物制造的生物化学基础一、生物药物制备方法的特点生物药物：生化药物、生物工程药物和生物制品以生物学和化学结合的手段，以生物材料为原料制取的。制造技术特点：（1）目的物存在于组成复杂的生物材料中一种材料含多种成分，其理化性质等千差万别，且处于代谢过程中，所以无固定工艺可循。（2）目的物含量极微，分离纯化难获高收率（3）生物活性成分离体后易变性破坏，保护其有效活性为制药工艺难点。（4）制造工艺几乎均在溶液中，理、化、生物学因素对制造影响大。经验成分多。（5）工艺流程长操作繁琐。（6）生物药物相对均一性生物药物分离制备方法的依据主要原理1.根据不同组分分配率的差别进行分离溶剂萃取、分配层析、吸附层析、盐析、结晶等小分子的AA，脂类化合物、维生素固醇类等2.根据生物大分子的特性采用多种分离手段交互进行。如蛋白质、多肽、酶类药物（1）分子大小形状：离心、透析、超滤（2）分子带电性：离子交换、电泳、等电聚焦（3）极性及溶解度：分配层析、盐析、溶剂提取等（4）配基特异性：亲和层析二、生物合成技术原理（一）生物细胞的代谢反应主要多利用微生物转化反应：利用微生物的代谢作用进行某些化学反应（酶催化反应）优点：产物具有立体构型单一，条件温和，公害少目前发展技术：以遗传工程为指导，发酵工艺为基础（细胞工程、酶工程）有机反应：50多种如水解、氧化、羟基化、环氧化等（二）半合成技术一个药物其部分结构由天然资源获得，然后用化学合成法制得最终产品或用化学合成半产品再用生物合成完成终产品。三、生物技术原理生物技术又称生物工程（bioengineering）基因工程：基因分离、制备、体外剪接、重组、扩增、表达和产物纯化技术；细胞工程：细胞的离体培养、繁殖、再生、融合以及细胞核、细胞质乃至染色体与细胞器移植改建等技术；酶工程：酶的工业化生产以及生物反应器和生物传感器等技术；发酵工程：微生物工程，在最适条件下，对单一菌种进行培养，为生产特定产品的生物工艺。现代生物技术核心内容:主要包括重组DNA技术和单克隆抗体技术生物工程药物：运用重组DNA技术和单克隆抗体技术生产的多肽、蛋白质激素、酶类药物以及疫苗、单抗和细胞因子类药物。重组DNA技术操作过程：（1）目的基因的获取（2）基因载体的选择与构建（3）目的基因与载体拼接（4）重组DNA导入受体细胞（5）筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞（转化子）（6）工程菌的大量培养与目的蛋白的生产。（一）基因载体载体Vector：质粒、λ－噬菌体、M13噬菌体、逆转录病毒DNA、昆虫病毒DNA等载体在宿主细胞内可独立复制完整的DNA分子，但利用宿主的酶系统，才能进一步进行基因表达。质粒plasmid：存在于细菌内染色体外环状双链DNA。可独立复制。质粒上往往存在1-3个耐药基因，使宿主菌具有耐药性，可作为筛选转化子的依据。基因工程用的质粒加入一个多克隆位点为外源基因导入提供插入位点。（二）目的基因的来源1.直接从染色体DNA分离（原核容易获得）2.人工合成：根据编码序列设计合成PCR技术：设计特异性引物，体外扩增特异DNA片段3.从mRNA合成cDNA4.基因文库G-文库：用限制性核酸内切酶将基因组DNA随机切割为多个片段，重组入同一类载体，建立多个重组子，全部转化入宿主细胞保存cDNA－文库：用细胞全部的mRNA经反转录制备cDNA后建库，应用时用探针杂交技术将目的基因“钓出”。（三）限制性核酸内切酶的应用核酸限制性内切酶能特异识别核酸某些碱基序列并加以切开。（提供建立重组子的结构）一般为4～8个碱基。平端切口：粘端切口：（四）重组体的构建用同种核酸内切酶分别切割载体和目的基因后，获得相同的切口.用连接酶将载体和目的基因连接起来形成DNA重组体。可用粘端连接方法。如无共同接口，可加人工接头。（五）重组体的转化将重组体导入适当的宿主细胞转化：将大肠杆菌制备感受态细胞，将重组体导入其中转导：为噬菌体或病毒重组体则需包装后导入宿主细胞（六）重组体的筛选与鉴定筛选以获得含目的基因的细菌（胞）1.根据重组体表型筛选（1）抗性基因筛选载体含有的对抗生素抗性基因，在含有其抗生素的培养基中存活（2）营养素依赖型缺陷细胞株利用2.限制酶切图谱分析酶切重组体，电泳根据分子大小等行为判断。3.核酸杂交技术用目的基因为探针，检测菌落有无重组子存在4.PCR扩增技术DNA重组技术的主要应用（1）大量生产基因工程药（2）定向改造生物的基因结构（3）基础研究细胞工程技术系统运用细胞学和遗传学的方法，按照人们的预先设计，有计划地改造细胞的遗传基础，以获得人类所