细菌感染的实验室诊断（一）.pdf

细菌感染的实验室诊断（一）

实验室诊断主要包括以检测致病菌及其抗原、产物或核酸为目的的细菌学

诊断，以及检测患者血清中特异性抗体为目的的血清学诊断。

一、细菌学诊断

（一）标本采集

细菌感染性疾病的实验室检查结果主要取决于临床标本的质量、采集时

间及方法、实验人员的技术熟练程度及经验。临床医生应该知道何时和怎样采

取标本，需作哪些实验室检查，以及如何解释结果。为提高致病菌检出率，避

免诊断错误或漏检，标本采集与送检过程应遵循下列原则：

1．严格执行无菌操作，尽量避免患者正常菌群或外界环境中杂菌污染标本。

采取局部病变标本处，不可用消毒剂，必要时宜以无菌生理盐水冲洗，拭干后

再取材。从呼吸道、消化道、泌尿生殖道、伤口或体表分离可疑致病菌时，应

与其特定部位的正常菌群及临床表现一并加以考虑，因为目前内源性感染呈不

断上升趋势。

2．根据致病菌在患者不同病期的体内分布和排出部位，采集不同的标本

（表7-1）。例如流行性脑膜炎患者取脑脊液、血液或出血瘀斑；伤寒患者在

病程第1～2周内取血液，第2～3周时可取粪便。尽可能采集病变明显部位的

材料。

3．应在疾病早期和使用抗菌药物之前采集标本，否则可能需停药数天后采

集，或者在分离培养时加入药物拮抗剂。

4．标本必须新鲜，采集后尽快送检，尤其是检测抵抗力弱的细菌。若不能

立即送检，应将标本置于特殊的转运培养基中，低温保存，以减缓致病菌的死

亡，阻止杂菌的过度生长。送检过程中，除不耐寒冷的脑膜炎奈瑟菌、淋病奈

瑟菌等要保温外，多数菌可冷藏送运。

（二）致病菌的检验程序

主要有直接涂片染色镜检、分离培养、生化试验、血清学试验等，有的尚

需作动物试验等。细菌学快速诊断新技术主要有核酸杂交（nucleicacid

hybridization）和聚合酶链反应（polymerasechainreaction,PCR）等。敏

感性、特异性和检测效率是影响临床诊断程序选择的重要因素。

1．直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检法可在显微镜下直接观察致病菌

的形态、大小、排列方式和染色特点。凡在形态和染色性上具有特征的致病菌，

直接涂片染色后镜检有助于初步诊断。例如痰中查见抗酸性细长杆菌，脑脊液

或淤血点中查到肾形成双排列的革兰阴性球菌，脓液中发现革兰阳性葡萄串状

球菌，或咽喉假膜中有异染颗粒的棒状杆菌时，可分别初步诊断为结核分枝

杆菌、脑膜炎奈瑟菌、葡萄球菌或白喉棒状杆菌。此外，尿沉渣中发现优势菌

类，或长期腹泻患者粪便中发现革兰阳性球菌和真菌等优势菌，均有重要的诊

断价值。在某些情况下，也可在直接涂片后，以特异性荧光抗体染色，在荧光

显微镜下观察，若出现有发荧光的菌体就是欲检验的细菌。例如粪便中的志贺

菌、霍乱弧菌，以及呼吸道标本中的嗜肺军团菌和百日咳鲍特菌等可用此技术

快速检出。

染色或不染色标本的形态学检查法较为简便、快速、价廉，为临床检验所

常用，特别是有的细菌尚不易进行人工培养，或培养时周期较长，只能通过直

接涂片染色并结合临床确诊。但是，直接涂片镜检法的敏感性不及分离培养法。

2．分离培养有很多种类的细菌在形态、排列方式和染色性上不能区分，

需进行细菌的分离培养，这是确诊细菌感染性疾病最可靠的方法（金标准），

并有助于选用抗菌药物及评价疗效。由于各种细菌的生物学特性有所差异，所

采用的培养基和培养方法也不尽相同。

从无菌部位采取的血液、脑脊液等标本，可直接接种至营养丰富的液体或

固体培养基；从正常菌群存在部位采取的标本，应接种至选择或鉴别培养基。

接种后置37℃孵育，一般需氧菌经16～20小时大多可形成菌落（colony），

厌氧菌和微需氧菌通常需2～3天才形成菌落。少数菌如布氏菌、结核分枝杆菌

生长缓慢，分别需培养3～4周和4～8周才长成可见菌落。根据细菌所需要的

营养、生长条件、菌落特征可作初步鉴别，确诊还需对纯培养物进行形态特征、

生化试验和血清学试验鉴定。分离培养法的阳性率要比直接涂片镜检高，但需

时较久。因此，遇白喉、气性坏疽等急性传染病时，可根据患者临床表现和直

接涂片镜检结果作出初步诊断并及时治疗，不必等待分离培养报告，以免贻误

治疗时间。

3．生化试验细菌的代谢活动依靠一系列酶的催化作用。不同细菌具有不

同的酶系，对营养物质的分解能力及其代谢产物不尽相同。检测