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规模化细胞收获与分离

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第一部分规模化细胞收获的策略 2

第二部分细胞分离技术的比较 3

第三部分磁性激活细胞分离 8

第四部分流式细胞术在细胞分离中的应用 10

第五部分细胞培养中的收获与分离 13

第六部分生物反应器中的细胞分离 15

第七部分分离后细胞的纯度评估 18

第八部分规模化细胞收获的挑战与展望 21

第一部分规模化细胞收获的策略

规模化细胞收获的策略

规模化细胞收获对于生物制药和细胞治疗等生物技术领域的诸多应用至关重要。为了实现高效、可靠的大规模细胞收获，已开发了多种策略。

机械收获

*离心收集：利用离心力分离细胞和培养基。通过旋转培养液，细胞沉降至容器底部，而培养基保留在上方。

*洗涤过滤：通过过滤膜过滤悬浮液，捕获细胞并洗涤掉残留的培养基。这种方法适用于悬浮培养的细胞，例如CHO细胞。

*切线流过滤：在切线流过滤器中，悬浮液沿圆柱形过滤器流动，细胞被捕获在过滤器表面。这种方法对于粘附性和聚集性细胞非常有效。

酶促消化

*胰蛋白酶消化：使用胰蛋白酶等酶消化细胞与培养基之间的连接。这种方法适用于贴壁培养的细胞，例如HEK293细胞。

*EDTA消化：EDTA通过螯合钙离子来松弛细胞与培养基之间的连接。这种方法适用于悬浮培养和贴壁培养的细胞。

选择性收获

*磁珠分选：使用带有抗体的磁珠靶向特定的细胞亚群。磁珠与细胞结合后，可以通过磁分离器将靶细胞与其他细胞分离。

*荧光激活细胞分选（FACS）：这种方法利用荧光抗体标记特定细胞亚群。标记的细胞可以通过流式细胞仪分选，并在不同收集容器中收集。

*微流体分选：基于微流体技术的设备可以根据细胞大小、形状或其他特征进行细胞分选。这种方法具有高通量和可定制性优点。

其他策略

*细胞膨胀：通过喂养新鲜培养基并调节培养条件，在收获前扩大细胞数量。

*分级收获：通过使用不同收获时间的重复批次，获得具有不同生长阶段和特性的细胞。

*培养基优化：通过优化培养基成分和培养条件，促进细胞生长和收获效率。

策略选择

选择最佳的规模化细胞收获策略取决于以下因素：

*细胞类型和培养条件

*目标细胞产品的特性

*吞吐量和成本要求

*下游处理工艺

通过仔细考虑这些因素，可以确定最适合特定应用的收获策略。

第二部分细胞分离技术的比较

关键词

关键要点

磁珠分选

1.基于磁性颗粒标签的细胞靶向和分离技术。

2.可与抗体、配体或其他生物分子结合，靶向特定细胞标记。

3.通过磁性分离器分离被磁珠标记的细胞，实现高纯度和特异性分离。

流式细胞术分选

1.基于光学检测和电荷分离的细胞分选技术。

2.利用流式细胞仪将细胞群悬浮在液体中，并通过光学信号对细胞进行区分。

3.根据细胞尺寸、复杂性和荧光标记，对细胞进行分选和收集。

微流控分选

1.利用微流体通道操纵和分离细胞的微流控技术。

2.通过微流体设备控制流体流动，利用细胞大小、密度或免疫标记进行分选。

3.实现高通量、高纯度和可规模化的细胞分选。

声学分选

1.基于声波对细胞产生的声学力的细胞分选技术。

2.声波的振动可以产生声学力，对不同大小、密度或可压缩性的细胞施加不同的力。

3.通过声学谐振器或声学透镜分离细胞，实现快速、非标记和非破坏性分选。

电泳分选

1.基于电场梯度对细胞施加力的细胞分选技术。

2.根据细胞大小、电荷和介电性质在电场中移动。

3.通过毛细管电泳或凝胶电泳将细胞分离成不同的亚群。

激光捕获显微分选

1.基于激光束聚焦对单个细胞进行选择性捕获的技术。

2.使用激光微束照射目标细胞，形成局部空泡，将细胞从周围细胞中捕获。

3.实现精确、无标记和高特异性分选单个细胞或特定细胞类型。

细胞分离技术的比较

细胞分离是生物医学研究和生物技术应用中至关重要的一步。通过分离细胞，可以研究不同细胞类型的功能、特异性发育和相互作用。常用的细胞分离技术根据分离的原理可分为以下几类：

1.密度梯度离心

密度梯度离心利用不同细胞类型的密度差异进行分离。将混合细胞悬液加入到密度梯度介质中（如Percoll或Ficoll），通过离心，密度不同的细胞会聚集在介质的不同层中。该技术常用于分离单个细胞类型，如单核细胞或淋巴细胞。

优点：

*分离效率高

*可分离多种细胞类型

*操作简单

缺点：

*耗时较长

*样品量受限

*离心力可能对某些细胞类型造成损伤

2.磁珠分选

磁珠分选利用抗体与特定细胞表面标记物结合的原理进行细胞分离。将特异性抗体偶联到磁珠上，然后与细胞混合。经