细胞分子生物学2010dna讲授.pptx

第五章DNA的复制;DNA通过复制将遗传信息由亲代传递给子代；通过转录和翻译，将遗传信息传递给蛋白质分子，从而决定生物的表现型。DNA的复制、转录和翻译过程就构成了遗传学的中心法则。

在RNA病毒中，其遗传信息贮存在RNA分子中。因此，在这些生物体中，遗传信息的流向是RNA通过复制，将遗传信息由亲代传递给子代，通过反转录将遗传信息传递给DNA，再由DNA通过转录和翻译传递给蛋白质，这种遗传信息的流向就丰富了中心法则的内容。;DNAdependentDNApolymerase——DDDP

DNAdependentRNApolymerase——DDRP

RNAdependentRNApolymerase——RDRP

RNAdependentDNApolymerase——RDDP;复制概述;4.1DNA复制概况;DNA以半保留方式进行复制，是在1958年由M.Meselson和F.Stahl所完成的实验所证明。该实验首先将大肠杆菌在含15N的培养基中培养约十五代，使其DNA中的碱基氮均转变为15N。将大肠杆菌移至只含14N的培养基中同步培养一代、二代、三代。分别提取DNA，作密度梯度离心，可得到下列结果：;4.1.2半保留复制的证据

;与复制相关的基本概念;;复制起始点的序列特征;G1

preparingforDNAreplication(cellgrowth)

S

DNAreplication

G2

ashortgapbeforemitosis

M

mitosisandcelldivision;Licensingfactor;Initiation:origin;Replicationfork;复制起点的结构特征

DNA在复制时，需在特定的位点起始，这是一些具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点（复制子）。;复制起始位点确定的方法;复制终点;复制速度;DNA复制的方向和方式;;Bidirectionalreplicationofacircularbacterialreplicon;Thelong,linearDNAmoleculesofeukaryoticchromosomesconsistofmutipleregions,eachwithitsownorgin.

Atypicalmammaliancellhas50000-100000repliconswithasizerangeof40-200kb.Wherereplicationforksfromadjacentreplicationbubblesmeet,theyfusetoformthecompletelyreplicatedDNA.Nodistinctterminiarerequired;DNAreplication;4.1.3DNA复制相关的酶及底物;DNA聚合酶的活性

;DNA聚合酶与脱氧核糖核苷酸的聚合;polⅠ为单一肽链的大分子蛋白质,可被特异的蛋白酶水解为两个片段，其中的大片段称为Klenowfragment，具有5→3聚合酶活性和3→5外切酶的活性。;polⅢ由十种亚基组成，其中α亚基具有5′→3′聚合DNA???酶活性，因而具有复制DNA的功能；而ε亚基具有3′→5′外切酶的活性，因而与DNA复制的校正功能有关。;DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ是在1999年才被发现的，它涉及DNA的错误倾向修复(errorpronerepair)。当DNA受到较严重损伤时，即可诱导产生这两个酶，使修复缺乏准确性（accuracy)，因而出现高突变率。高突变率虽会杀死许多细胞，但至少可以克服复制障碍，使少数突变的细胞得以存活。;原核生物中的三种DNA聚合酶?;在真核生物中，目前发现的DNA聚合酶有五种，分别命名为DNA聚合酶α（polα），DNA聚合酶β（polβ），DNA聚合酶γ（polγ），DNA聚合酶δ（polδ），DNA聚合酶ε（polε）。

其中，参与染色体DNA复制的是polα（延长滞后链）和polδ（延长前导链），参与线粒体DNA复制的是polγ，polε与DNA损伤修复、校读和填补缺口有关，polβ只在其他聚合酶无活性时才发挥作用。;大肠杆菌DAN聚合酶（DNApolymerase)

;连接酶;三、RNA引物

参与DNA复制的DNA聚合酶，必须以一段具有3’端自由羟基（3’-OH）的RNA作为引物(primer)，才能开始聚合子代DNA链。

RNA引物的大小，通常为1－10个核苷酸。RNA引物的碱基顺序，与其模板DN