基因功能的研究方法.ppt

基因功能的研究措施（一）;一、计算机预测基因功能

二、试验确认基因功能

1．基因失活是功能分析的重要手段

1.1基因敲除（Geneknock-out）

1.2基因敲除的技术路线

1.3基因敲除的重要应用领域及国内外研究进展

1.4基因失活的表型效应有时不易辨别

2．转座子突变库的构建

2.1插入序列

2.2试验环节;3．内含子归巢突变

4．基因的超体现用于功能检测

5.反义RNA

5.1反义RNA的分类和作用机制

5.2ticRNA(transcriptioninhibitorycomplementaryRNA)

5.3反义RNA的功能

5.3.1调控细菌基因的体现

5.3.2噬菌体溶菌/溶源状态的控制

5.3.3IS10转位作用的克制

5.4人工合成构建反义RNA

5.5使反义RNA分子稳定的措施;三、其他的基因功能研究措施

１．噬菌体展示(phagedisplay)

２．酵母双杂交(yeasttwo-hybridization)

2.1概念

2.2试验环节

2.3运用酵母双杂交发现新的蛋白质和蛋白质的新功能

2.4运用酵母双杂交在细胞体内研究抗原和抗体的互相作用

2.5运用酵母双杂交筛选药物的作用位点以及药物对蛋白质之间互相作用的影响

2.6运用酵母双杂交建立基因组蛋白连锁图(GenomeProteinLinkageMap）

3.开放读框次序标签(open-reading-framesequencetags,OSTs）

;确认DNA次序中的基因序列后，下一种问题就是探知其功能，这是基因组研究的一种难度很大的领域。

某些已完毕测序的基因组次序分析表明，我们所理解的基因组内容比真实的状况少的多。如大肠杆菌与啤酒酵母，在未开始基因组测序前已经完毕了大量常规的遗传学分析，当时遗传学家认为这2种生物的大多数基因已经通过突变鉴定，但实际上尚有诸多空白。

大肠杆菌编码蛋白质的4288个基因中，以往懂得的只有1853个，仅占43%。至于啤酒酵母，所知更少，仅为30%。;一、计算机预测基因功能;种间同源基因或直系基因(orthologousgene)这是指不一样物种之间的同源基因，它们来自物种分隔之前的同一祖先。

种内同源基因或平行基因(paralogousgene)同一种生物内部的同源基因，它们常常是多基因家族的不一样组员，其共同的祖先基因也许存在于物种形成之后，也也许出现于物种形成之前。

同源基因一般不会有完全一致的核苷酸次序，由于这两个基因在???现后独立的发生随机突变，但它们有相似的次序构成，大部分未突变的核苷酸位置是相似的。

当一种新的基因序列被确认后，根据同源性可从数据库中查找已知次序的同源基因。根据进化的有关性可从已知的同源基因推测新基因的功能。;根据同源性预测基因时必需注意如下几点：;同源性分析可以给出整个基因或

某一区段功能的信息;有时在2个无明显亲缘关系的基因之间会出现局部相似的区段。这种状况表明，2个无亲缘关系的蛋白质也许具有相似的功能，相似的次序是功能的关键区域。

虽然基因自身无共同的祖先，但其功能域却有共同的来源。它们都是古老祖先的后裔，在进化中首先发生独立突变，另首先又因基因组重排成为新基因的构成部分。例如信号传导蛋白，此类蛋白质一般均有2个基本的功能域，即接受信号的功能域和传达信号的激酶域。;二、试验确认基因功能;1．基因失活是功能分析的重要手段

老式的遗传分析重要借助突变型研究表型变异的遗传基础，运用紫外线诱导及化学试剂处理可使生物群体产生突变个体，也可从自然的群体中发现突变体。

经遗传分析将突变基因定位，然后观测这一突变体与否与变化的表型对应。在此基础上采用分子生物学措施深入分离与克隆目的基因。;所谓定位克隆就是根据与突变位点连锁的分子标识，然后通过物理图寻找靶位点。

上述老式遗传学分析的原理同样可用来设计从基因到表型的研究。假如我们能找到某种措施，根据待测基因的次序使生物体内该基因失活，亦可鉴别由此产生的表型变异。;1.1基因敲除（Geneknock-out）

概念：基因敲除除可中断某一基因的体现外，还包括引入新基因及引入定点突变。

即可以是用突变基因或其他基因敲除对应的正常基因，也可以用正常基因敲除对应的突变基因。;基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原剪发展起来的一门新技术。80年代初，胚胎干细胞（ES细胞）分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。

1985年，初次证明的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。

到1987年，Thompsson初次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。此后的几年中，基因敲除技术得到了深入的发展和完善。;