生物化学实验.pptxVIP

生物化学实验

-α-淀粉酶分离提纯技术研究进展α-淀粉酶分离提纯的研究历史α-淀粉酶的研究现状123

生物化学实验α-淀粉酶，系统名称为1,4-α-D-葡聚糖葡聚糖水解酶，别名为液化型淀粉酶、液化酶、α-1，4-糊精酶。黄褐色固体粉末或黄褐色至深褐色液体，含水量5%~8%。溶于水，不溶于乙醇或乙醚

1α-淀粉酶分离提纯技术研究进展

α-淀粉酶分离提纯技术研究进展为了更好地研究α-淀粉酶的性质与应用α-淀粉酶，我们需要不断地从不同的生物体内提取α-淀粉酶并将其高纯化。随着生物技术的不断发展，分离提纯的方法也越来越复杂越精确α-淀粉酶(α-Amylase)是一种内切葡萄糖苷酶，属于淀粉酶。米黄色、灰褐色粉末。能水解淀粉中的α-1,4-葡萄糖苷键，在催化水解α-1,4-糖苷键只能催化水解直链淀粉，生成α-麦芽糖和少量葡萄糖，能将淀粉切断成长短不一的短链糊精和少量的低分子糖类，从而使淀粉糊的黏度迅速下降，即起到降低稠度和液化的作用，所以此类淀粉酶又称为液化酶作用温度范围60-90℃，最适宜作用温度为60-70℃，作用pH值范围5.5-7.0，最适pH值为6.0

α-淀粉酶分离提纯技术研究进展其水解淀粉的产物主要是高含量的麦芽糖和一些低聚糖及少量的葡萄糖而细菌α-淀粉酶最适作用温度高(中温α—淀粉酶70～80℃，耐高温α-淀粉酶为95～105℃)，水解淀粉的主要产物是糊精因此，细菌α-淀粉酶只能用于发酵工业，而真菌α-淀粉酶则广泛地应用于淀粉糖浆、低聚糖、啤酒、烘焙食品、面制品等的生产，具有十分广阔的市场前景性质：真菌α-淀粉酶是由曲霉属微生物发酵产生的一种α-淀粉酶与细菌α-淀粉酶不同的是，真菌α-淀粉酶的最适作用温度为55℃左右，超过60℃开始失活Ca2+具有一定的激活、提高淀粉酶活力的能力，并且对其稳定性的提高也有一定效果。主要存在于人的唾液和胰脏中也存在于麦芽、蟑螂涎腺、芽胞杆菌、枯草杆菌、黑曲霉和米曲霉中

α-淀粉酶分离提纯技术研究进展具有反应速度快、效率高、成本低等优势

2α-淀粉酶分离提纯的研究历史

α-淀粉酶分离提纯的研究历史1991年中科院北京微生物研究所孔显良等将米曲霉(Aspergilluroryzae)突变株6-193的麦麸固体培养物，经水浸泡其中α-淀粉酶活力为每克于曲600单位用硫酸铵分段沉淀，SephadexG-75凝胶过滤和制备垂直平板电泳纯化，经PAGE鉴定为一条带麦芽糖和麦芽三糖二者之和占69.4%，与Novo公司Norman报道的相似，属糖化型α-淀粉酶，可用于制糖、啤酒和面包食品工业，并可以替代一淀粉酶生产麦芽糖浆以此来研究其性质，对其与可溶性淀粉溶液作用后的产物经薄层色谱分析，根据扫描结果，葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖分别占6.4%、32.3%、37.1%、10.9%米曲霉α-淀粉酶作为面包添加剂比细菌α-淀粉酶耐热性低，避免面包在制造过程中造成过度液化现象，而使生产的面包发粘，在当时此酶是目前较理想的面包食品类的添加剂

α-淀粉酶分离提纯的研究历史1992年姜涌明等采用壳聚糖絮凝、淀粉吸附、乙醇沉淀等步骤，从枯草芽孢杆菌86315发酵液中提取了α-淀粉酶。然后用SepbadexG-100凝胶过滤、DEAE一纤维素柱层析进一步提纯，得到DISC-电泳一条带的淀粉酶制剂，从而更好地研究其动力学问题1994年西北大学李汉、李华儒等率先开发了一个用强阴离子高效液相色谱分离纯化α-淀粉酶的新方法，在给定的条件下纯化工业α-淀粉酶，其活性回收率达96%，比活性为388u/mg蛋白质.纯化倍数提高30倍，经SDS分析，得到分子量分别为58K和33K两条α-淀粉酶谱带此法纯化α-淀粉酶简单、快速、救率高，不仅能纯化工业粗酶，也可纯化其它来源的α-淀粉酶

α-淀粉酶分离提纯的研究历史在当时，此法的研究成功为大规模制备高纯度α-淀粉酶提供了一个新工艺路线在1995年时，唐梓进、肖俊方等针对工业α-淀粉酶常混有其他酶类的问题改良了淀粉微球亲和吸附纯化α-淀粉酶的方法，将淀粉做成网状结构微球，作为亲和吸附载体，装柱后用于吸附、纯化淀粉酶此球机械强度大，对酶吸附量高达125mg/mL床体积低温条件下(4℃)操作，球与酶很少反应，重复操作9次未见明显变化工业生产较纯的酶经一次过柱后，酶比活仍提高2.3倍，每克干粉酶活提高16.5倍整个操作过程简单、方便，酶失活很少，过柱后回收率高达91.6%此球既适用于工业生产中纯化淀粉酶，也适用于实验室中淀粉酶的纯化及分析

α-淀粉酶分离提纯的研究历史1淀粉球对淀粉酶吸附及解吸时pH值和离子强度的改变、酶本身构象变化的研究，又能为酶与底物间相互作用提供理论依据22004年景娟等再次对不同龋敏感者唾液α-淀粉酶的研究，采用XDF-SGM型疏水柱，通过疏水色谱技术来分离提纯唾液α-