生化技术第七章 光学检测技术教学课件.pptVIP

16.在18℃的房间里，放有一杯酒精，将温度计放入酒精中，示数稳定后取出，观察它的示数，则发现（）A：高于18℃、B：低于18℃C：先下降，后上升D：一直等于18℃C17.蒸馒头时，会看到笼屉周围向外喷出很多白气，这些白气是：（ ）

A：水蒸气

B：沸腾产生的水蒸气

C：水蒸气遇冷液化成的小水滴

D；是蒸发产生的水蒸气C第七章光学检测技术利用物质所具有的各种光学性质，对物质进行定性、定量及结构分析的技术。包括：旋光检测、析光检测、荧光检测、分光光度检测、散射光谱检测等。生化领域常用：分光光度检测、旋光检测、荧光检测一分光光度检测又称分子吸收光谱检测，是利用物质分子所特有的吸收光谱而对物质进行定性定量测定的检测技术。紫外分光光度检测（200～400nm）可见光分光光度检测（400～760nm）红外光分光光度检测（760～10000nm）1样品溶液的配备（1）对各种光有选择性吸收特性的物质（2）本身没有颜色的物质，转变为有色的物质溶液2样品的检测选择好入射光的波长，空白液调零，测定。3待测物质的定性分析（1）将样品溶液在一定条件下（pH、温度、缓冲液等）测得的吸收光谱与物质的标准吸收光谱相对照，推断样品是什么。（2）根据样品吸收光谱中峰顶与峰谷吸光度之比值，与相当条件下资料所载的比值比较，推断样品是什么。如ATP:OD280/OD260=0.85,OD250/OD260=0.90AMP:OD250/OD260=0.85,OD280/OD260=0.22(3)将分光光度检测与层析或电泳分离技术相配合，综合判断。4待测物质的定量分析（1）标准曲线法注意：对于存在有干扰物质的样品要进行校正。（2）Lambert-BeerE=KCL,K-消光系数二旋光检测技术利用旋光计测量出旋光物质（光学活性物质）对偏振光旋转角度的方向（左旋或右旋）和大小，从而进行定性与定量分析的技术，称为旋光检测技术。旋光物质对偏振光的旋转方向和角度大小是该物质的固有特性。偏振光旋转的方向和角度称为旋光度。左旋（－），右旋（＋）。物质的旋光度主要取决于物质本身的结构，此外与入射光的波长及温度有关，对溶液而言，还与溶液性质、溶液浓度和溶液厚度有密切关系。溶剂确定后，α＝[α]tλLC/100α－旋光度L－溶液厚度（分米）[α]tλ－比旋光度，通常采用[α]20DL－溶液厚度（分米）C－溶液浓度，100mL溶液中所含物质的克数。根据物质的[α]20D和实际测出的α，可计算得到C=α×100/([α]tλL)操作要点：（1）样品液的配制（2）旋光度的测定旋光法测定味精浓度样品溶液配制精确称取味精样品10.00g，加40～50mL蒸馏水溶解，搅拌加入分析纯盐酸16mL，使味精全部溶解。冷却至室温，蒸馏水定容至100mL。旋光仪调零预热10min，放进滤光片。取16mL分析纯盐酸蒸馏水定容至100mL。装满旋光管，调整零点。样品液测定样品洗涤旋光管三次，装满旋光管，放进样品室，测定旋光度，记录温度。计算C=α×100/([α]tλL)[α]tλ＝32＋0.06×（20－t)C味=C×187.13/147.13味精纯度＝C味/样品重量三荧光检测技术有些物质的分子吸收了一定波长的光（辐射能），分子内电子被激发到较高的能级以后，由于电子旋转或酸离解等消耗一部分能量，当电子返回到低能级状态时，重新放出较长波长的光，这就是荧光。不同物质放射的荧光光谱不同，荧光的强度与物质的浓度有关。检测方法直接检测荧光性物质利用非荧光物质与荧光试剂反应后检测在荧光性物质溶液中加入消光物质，测定荧光的减少常用物质测定的荧光试剂p183(自学）思考题生化中的光学检测方法主要有哪些?分光光度法如何对物质进行定性定量?旋光法如何测定光学活性物质含量(计算)?荧光检测中蛋白质和氨基酸常用的荧光试剂是什么?1.关于沸点，下列说法正确的是（）A.任何液体的沸点都是固定不变的B.同一种液体的沸点随液面上气压的升高而降低C.在高山上，随海拔的升高沸点也升高D.不同液体的沸点一般不同D2.在标准大气压下，水温100℃后()A.一定能沸腾B一定不能沸腾C.水继续吸热一定能沸腾D.无法确定C3.水壶中的水沸腾后，仍放在火炉上加热，水壶中水的温度将