DB15T 1238-2024 绵羊肺腺瘤病毒双抗体夹心ELISA检测技术.docx

ICS65.020.30CCS

ICS

65.020.30

CCS

B40

内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准

DB15/T1238—2024

代替DB15/T1238-2017

绵羊肺腺瘤病毒双抗体夹心ELISA

检测技术

DetectionofdoubleantibodysandwichELISAforjaagsiektesheepretrovirus(JSRV)

2024-05-31发布 2024-07-01实施

内蒙古自治区市场监督管理局 发布

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DB15/T1238—2024

前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件代替DB15/T1238-2017《绵羊肺腺瘤病毒双抗体夹心ELISA检测技术》，与DB15/T1238-2017

相比，除了结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：

增加了“规范性引用文件”一章（见第2章）；

增加了鼻拭子样品采集和保存（见7.2）；

更改了包被抗体（见附录A.4，2017年版A.4）；

更改TMB底物显色液和终止液为商品化试剂，删除了原有的配制方法（见5.8、5.9，2017年版A.8、A.9）。

本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。

本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。本文件起草单位：内蒙古农业大学。

本文件主要起草人：刘淑英、李慧萍、张良、陈思旭、苗佳佳、刘月。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：

——2017年首次发布为DB15/T1238-2017；

——本次为第一次修订。

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DB15/T1238—2024

绵羊肺腺瘤病毒双抗体夹心ELISA检测技术

范围

本文件规定绵羊肺腺瘤病毒双抗体夹心ELISA检测技术的试剂、材料与设备、样品前处理、操作方法、结果判定等。

本文件适用于羊外周血液和鼻拭子样品中绵羊肺腺瘤病毒的检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB19489 实验室生物安全通用要求

NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

绵羊肺腺瘤病毒 jaagsiektesheepretrovirus，JSRV

引起绵羊肺腺瘤的病原，该病毒完整的囊膜蛋白具有致癌作用，位于病毒粒子的最外层，是构成病毒粒子的主要结构蛋白。

衣壳蛋白 capsid，CA

病毒的核心蛋白，蛋白含有长约20个氨基酸残基构成的具有高度免疫原性的结构域，且序列高度保守，为病毒的特异抗原决定簇。

跨膜蛋白胞质尾区 transmembraneproteincytoplasmictail，CT

病毒囊膜蛋白中跨膜蛋白的一个功能区，由44个氨基酸组成，该区域含有高度保守的YXXM序列，能特异性的识别外源性JSRV。

双抗体夹心ELISA技术 techniqueofdoubleantibodysandwichELISA

DB15/T1238—2024

特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样品中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体—抗原—固相抗体复合物显色来检测抗原及其含量的技术。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

HRP：辣根过氧化物酶（Hydrogen-peroxideOxidoreductase）OD：吸光度（OpticalDelnsity)

PBS：磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferedSaline）

PBST：Tween-20磷酸盐缓冲液洗涤液（Phosphate Buffered Saline with Tween-20)pH：酸碱度（PondusHydrogenii）

TMB：3,3,5,5-四甲基联苯胺（3,3′,5,5′-Tetraethylbenzidine）

试剂

除非另有说明，在检测中使用的化学试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T6682中三级水的要求。

红细胞裂解液。配制按照附录A中A.1。抗体样品稀释液。配制按照附录A中A.2。包被缓冲液。配制按照附录A中A.3。

包被抗体。配制按照附录A中A.4。酶标抗体。配制按照附录A中A.5。

洗涤液。配制按照附录A中A.6。封闭液。配制按照附录A