猫呼吸道症候群病原分子诊断重组酶介导链替换核酸扩增法.pdf

猫呼吸道症候群病原分子快速诊断重组酶

介导链替换核酸扩增法

1范围

本文件规定猫呼吸道症候群重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA法)分子快速诊断技术规范要求。

本文件适用于猫呼吸道症候群（猫杯状病毒、猫疱疹病毒、猫支原体、猫衣原体、猫波氏杆菌）兽

医临床快速定性诊断。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

猫杯状病毒：felinecalicivirus,FCV

猫杯状病毒属于杯状病毒科(Caliciviridae)水疱疹病毒属病毒(Vesivirus)病毒。病毒粒子呈球形,无囊

膜,为线性单股正链RNA病毒,可感染家猫及其他猫科动物。

3.2

猫疱疹病毒：felineherpesvirus,FHV

猫疱疹病毒属疱疹病毒科，甲型疱疹病毒亚科病毒，外有囊膜，双股的DNA，于细胞核内进行增

殖，并形成核内包涵体，可感染家猫及其他猫科动物。

3.3

猫支原体：felinemycoplasma,Myc

猫支原体是一种革兰氏阴性的杆状球菌，主要借由宿主吞噬细胞吞噬作用或借细胞之胞饮作用将基

体摄入细胞内，主要引起猫支原体肺炎、上呼吸道感染和慢性支气管炎等。

3.4

1

猫衣原体：chlamydophila，C

猫衣原体，是一种细胞内革兰氏阴性菌，主要引起猫科动物眼部感染及上呼吸道感染，慢性结膜炎

等。

3.5

猫波氏杆菌：bordetellabronchiseptica,Bb

猫波氏杆菌是一种需氧革兰氏阴性菌,主要影响猫的呼吸道系统，出现流鼻涕、打喷嚏咳嗽呼吸急

促等症状，常与其他细菌病毒混合感染引发各种疾病。

3.6

实时荧光RAA：Real-time-RAA

一种重组酶介导链替换的恒温核酸快速扩增技术(简称RAA技术)。利用从细菌或真菌中获得的重组

酶，在恒温下(一般为37℃~42℃),该重组酶可与引物紧密结合，形成酶和引物的聚合体，在单链DNA结

合蛋白SSB的帮助下，打开模板DNA的双链结构，当引物在模板DNA上搜索到与之完全匹配的互补序

列时，在DNA聚合酶的作用下，边转录边形成新的DNA互补链，扩增产物以指数级增长。利用荧光探

针的标记，随着RAA反应的进行，RAA产物与荧光信号的增长呈现对应关系。

3.7

实时逆转录荧光RT-RAA：RT-real-time-RAA

一种重组酶介导链替换的恒温核酸快速扩增技术(简称RT-RAA技术)。利用从细菌或真菌中获得的

重组酶，在恒温下(一般为37℃～42℃),该重组酶可与引物紧密结合，形成酶和引物的聚合体，在单链

DNA结合蛋白SSB的帮助下，打开模板DNA的双链结构，当引物在模板DNA上搜索到与之完全匹配的

互补序列时，在逆转录酶和DNA聚合酶的作用下，边转录边形成新的DNA互补链，扩增产物以指数级

增长。利用荧光探针的标记，随着RAA反应的进行，RAA产物与荧光信号的增长呈现对应关系。

3.8

CT值：cyclethresholod

每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数。

3.9

T值：cyclethresholod

每个反应管内荧光信号达到设定阈值时所需要的时间。

4符号和缩略语

下列符号适用于本文件。

c——核酸浓度，单位为微克每微升(μg/μL)

A——260nm处的吸光值

N——核酸稀释倍数

2

下列缩略语适用于本文件。

BS-RecA：枯草芽孢杆菌重组酶(Bacillussubtilisrecombinase)

Bsu：枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)

CTAB