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鸡红螨病诊断技术规范

1范围

本文件规定了鸡红螨鉴别和鸡红螨病诊断的显微镜观察及PCR扩增鉴定要求，描述了相应的样品制

备方法和结果判定的规则。

本文件适用鸡红螨病的临床诊断及病原检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用本文

件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

GB19489实验室生物安全通用要求。

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫。

3术语和定义

3.1鸡红螨Poultryredmite

鸡皮刺螨Dermanyssusgallina

属节肢动物门（Arthropoda）、蛛形纲（Arachnida）、蜱螨目（Acarina）、皮刺螨科（Dermanyssidae）、

皮刺螨属（Dermanyssus）的一种寄生于鸡、鸽等多种禽类的体外吸血寄生虫。

3.2鸡红螨病Poultryredmitedisease

由鸡红螨寄生在鸡舍墙缝，料槽、水线、笼具的缝隙等较为隐蔽黑暗处，通过叮咬引起鸡皮肤红肿、

损伤、炎症以及贫血、消瘦生产性能下降为主要症状的体外寄生虫病。

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4缩略语

下列缩略语适用于本文件：

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）。

DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）。

dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（Deoxy-ribonucleosideDriphosphate）。

ITS：内转录间隔区（InternalTranscribedSpacer）。

TAE：Tris-乙酸电泳缓冲液（TrisAcetate-EDTABuffer）。

BLAST：基础比对工具（BasicLocalAlignmentSearchTool）。

5试剂、耗材和设备

5.1试剂

除特别规定外，在检测中使用的试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682的要求。

香柏油。

丙酮。

1%乙酸。

KOD-plusPCR扩增试剂盒，包含DNA聚合酶、缓冲液和2.5mM的dNTP混合物。

LoadingBuffer。

4%戊二醛。

PBS缓冲液。

DL2000DNAMarker。

1×TAE（见附录A1）。

1%琼脂糖（电泳级）（见附录A2）。

不同浓度乙醇。

5%氢氧化钠（见附录A3）。

绿如蓝®DNAGreen核酸染料。

加拿大树胶。

DNA提取试剂盒。

鸡红螨阳性对照（使用经显微镜形态学检测确认为鸡红螨的虫体提取的基因组DNA）。

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5.2耗材载玻片。

1.5mL、2mL离心管。

针管。

200μLPCR管。

5.3设备

光学显微镜（含100×物镜）。

扫描电子显微镜。

PCR扩增仪。

核酸电泳系统。

凝胶成像仪。

6生物安全要求：

6.1样品的采集

应按照“GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫”的要求进行采样。具有掌握相关专业知识

和操作技能的工作人员操作，操作时应带上手套、口罩、工作服，身上喷洒驱蚊胺或植物源驱避剂；使

用大号毛笔将样品从鸡体或螨类聚集堆直接扫进自封袋中，防止螨虫逃逸扩散。

6.2样品鉴定

应按照GB19489要求，在生物安全1级（biosafetylevelBSL）实验室中进行检测工作，检测后

的样品应按照GB/T27401中“实验试剂和废弃物管理”规定执行。

7临床诊断

7.1临床症状：

1)患病鸡只出现大量羽毛脱落、啄毛。感染严重时，鸡群开始燥动不安，容易惊群，夜间有鸡惊

叫；

2)鸡皮肤有红疹和损伤