生化检验基础知识课件.ppt

对不是因操作不当引起的溶血、脂血或胆红素血，应在检验报告上注明，供医生参考。尿液、脑脊液和胸腹水等标本常需离心，取上清液进行分析分离后的标本若不能及时检测或需保留以备复查时，一般应放于4℃冰箱，某些检测项目的标本存放于-20℃冰箱更稳定。标本存放时需加塞，以免水分挥发而使标本浓缩。需注意的是，某些检测指标如乳酸脱氢酶的标本应存放于室温，置4℃反而不稳定。标本采集后应尽快送实验室分析，标本管道传递系统可加快标本传递速度和避免标本的错误传递。若标本不能及时转运到实验室或欲将标本送到上级部门或检测中心进行分析时，应将标本装入试管密封，再装入乙烯塑料袋，置冰瓶或冷藏箱内运输，运送过程中应避免剧烈震荡。要视所有标本为传染品，对“高危”标本，如乙肝病人标本、艾滋病病人标本等，要注明标识；急症或危重病人标本要特别注明。严禁标本直接用口吸取、接触皮肤或污染器皿的外部和实验台。标本用后均要做消毒处理，盛标本的器皿要消毒处理或毁型、焚烧。二、比色分析的要点及注意事项1.?分光光度计测量误差：由朗伯-比尔定律可知，只有在一定的浓度范围内，即一定的吸光度范围同内，由分光光度计测量所引起的测定结果的相对误差才是较小的；当透光率接近0或1.0时，其相对误差趋于无限大；一般在百分透光率在10~80%的范围内(即吸光度在1~0.1)，浓度测量相对误差较小；对于精密度高的仪器。当吸度时，百分透光率约为20-60%，测量误差约为1%。减少分光光度计的测量误差的条件有

???选择适宜波长的入射光：由于有色物质对光有选择性吸收，为了使测定结果有较高的灵敏度，必须选择溶液最大吸收波长的入射光。

???控制吸光度A的准确的读数范围：由朗伯-比耳定律可知，吸光度只有控制在0.2~0.7读数范围内时，测量的准确度较高。

???选择参比溶液：参比溶液是用来调节仪器工作零点的。若样品溶液，试剂，显色剂无无色可用蒸馏水作参比溶液；反之应采用不加显色剂的样品液作参比溶液2.显色反应及其影响因素显色反应一般要求

(1)选择性好:显色剂最好只与一种被测组分起显色反应;

(2)灵敏度高:灵敏度高有助微量组分的测定;

(3)有色化合物性质稳定:确保前后测定准确.

(4)显色剂与有色物颜色反差大:两者最大吸收波长之差应大于60nm;

(5)显色反应要易于控制:结果的确保实验再现性.影响显色反应的主要因素

(1)显色剂用量:通过实验来确定最适用量;

(2)反应液的酸碱度(pH)溶液酸碱度直接影响金属离子与显色剂存在形式以及有色化合物组成的稳定性.

(3)反应温度:不同的显色反应需要不同的反应温度,一般显色反应可在室温下完成.

(4)显色反应时间:显色反应的速度有快有慢.

(5)干扰离子的影响:应采用适当方法消除其影响3.722型分光光度计使用操作和注意事项注意事项：①.每台仪器所配套的比色皿不能与其它仪器上的比色皿单个调换。②.如果大幅度改变测试波长时，需等数分钟后才能正常工作。（因波长由长波向短波或短波向长波移动时，光能量变化急剧，光电管受光后响应较慢，需一段光响应平衡时间。③.如果显示数值有异常很可能为钨灯已坏，请尽早更换。4.用于免疫测定，基本原理是：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过量时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物的含量。免疫浊度测定法按照仪器设计的不同可以分为两种，即比浊仪测定（turbidimetermeasure）和散射比浊仪测定（nephelomitermeasure）。比浊仪测定是测量由于反射、吸收或散射引起的入射光衰减，其读数以吸光度A表示。A什反映了入射光与透射光的比率（A＝2－log10T，T代表浊度百分比）。散射比浊仪测定是测量入射光遇到质点（复合物）后呈一定角度散射的光量，该散射光经放大后以散射值表示。测定方法有终点法和速率法两种。终点法是在抗原-抗体反应达到平衡时，即复合物形成后作用一定时间，通常是30-60min，复合物浊度不再受时间的影响，但又必须在聚合产生絮状沉淀之前进行浊度测定。速率法是在抗原抗体结合反应的过程中，在单位时间内两者结合的速度。速率法是测最大反应的速度，即反应达到顶峰时的峰值。抗原抗体结合反应在几十秒内得出结果，峰值的高低与抗原的量成正比，峰值出现的时间和抗体浓度、抗原抗体的亲和力直接相关。速率法的灵敏度和特异性都比终点法好。免疫透射浊度法，其反应曲线不规则，试验前进行五点定标，按曲线回归计算。全自动生化分析仪一、良好工作环境文章1)环境温度：18℃～32℃，工作中波动小于4±2℃、热量11000