分离答案第六章.docx

第六章高效薄层色谱

1．薄层色谱与高效液相色谱比较有那些优点？

TLC的优点：

能同时分离多个样品 2.固定相和移动相选择和变换具有较大灵活性 3.不需要特殊设备、投资少，可以手工操作 4.省溶剂、省材料、省时间、经济 5.未知组分分离后可制备，用于定性 6.可以作为HPLC条件选择预实验

解释比移值和分离度。

(1)比移值（Rf）：溶质移动距离与流动相移动距离之比。

R=2d/(w1+w2)

高效薄层色谱电眼点样方法。

点样方法

定量毛细管（玻璃，铂－铱毛细管）(2)自动点样（CAMAG公司Nanomat点样器）(3)接触点样（contactspoting）

第七章高效毛细管电泳和毛细管电色谱

什么是高效毛细管电泳？及其特点（与HPLC比较）。

高效毛细管电泳是以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各

组分之间淌度或分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术。

（与传统电泳技术和高效液相色谱比较）

?????? 仪器简单，操作方便，容易实现自动化。

?????? 分离效率高，分析速度快。(105-106，3.1min分离36种无机及有机阴离

子)

?????? 操作模式多，分析方法开发容易。

?????? 实验成本低，消耗少。（1-50nL）

?????? 实验成本低，消耗少。（1-50nL）

?????? 分离在水相介质中进行。

?????? 应用范围极广。

什么电渗流，以及电渗流产生的原因？

电渗流当在含有缓冲溶液的毛细管柱两端施加高电压时，管内可迁移的被水化的离子向阴极或阳极移动，使管内液体随迁移着的离子一道移动，形成一种液流，称之为电渗流（electroosmoticflow，EOF），

电渗流产生的原因：毛细管柱内表面存在硅醇基,当pH3时，硅醇基Si-OH离子

化，所产生的SiO-负离子使毛细管壁带负电荷。缓冲溶液中的阳离子靠静电吸附和分子扩散在固液界面形成双电层，产生电势差。当两端施加电压时，在双电层的扩散外层中，阳离子向阴极移动，由于离子是被水化的，因此，在缓冲液

中的液体也随迁移着的阳离子一道向阴极移动，产生电渗流。

影响电渗流的因素有那些？控制电渗流有何意义。

（a）pH值

电渗流正比毛细管内壁的ζ 电势，对于相同材料毛细管，管中溶液pH值不同时，它们的表示电荷特性不同，毛细管ζ 电势不同，电渗流的大小也不同。

介质成分和浓度

离子强度 介质离子强度影响双电层厚度，溶液粘度和工作电流，因此影响EOF大小。

温度影响溶液粘度，温度高，粘度低， EOF大。

添加剂为改善分离效率和选择性常常加入添加剂如：中性盐类、两性离子、表面活性剂、有机溶剂等。

电渗是伴随电泳产生的一种电动现象，在CE分离中扮演着重要角色．多数情况下，EOF速度比电泳速度快5一7倍，因此，在CE中利用EOF可将正、负离子和中性分子一起朝一个方向（如阴极方向）产生差速迁移，在一次CE操作中同时完成正、负离子的分离分析．

通过EOF大小和方向的控制，还可以影响CE分离的效率、选择性和分离度，成为优化分离条件的重要参数

柱的内表面变化对EOF非常敏感，EOF的细微变化将严重影响CE分离的重视性

（迁移时间和峰面积）．所以，EOF的控制是CE中的一项重要任务

毛细管电泳的迁移时间及计算公式。

迁移时间：一种溶质从加电压开始迁移至检测

器所需时间称迁移时间，（也称保留时间）用t表示，它等于迁移距离除以速度，公式表示为:

Lef：毛细管有效长度 μap:表观淌度 ?ap：溶质的表观速度

用于离子的表观淌度计算μap=Lef?L/V?t

离子型物质迁移时间为：中性物质，迁移时间为：

写出三种毛细管电泳检测器。

紫外、二级管陈列 激光诱导荧光 电化学 质谱CE-MS

写出毛细管电泳分离的五种模式，并指出其分离依据。

方式 分离依据 应用

毛细管区带电泳（CZE）自由溶液的淌 离子型化合物

CapillaryZone 度

Electrophoresis

胶束电动色谱（MEKC）与胶束间疏水 离子和中性化MicellerElectrokinitic 性/ 合物Chromatography 离子性相互作

用

毛细管凝胶电泳（CGE）分子大小差异 生物大分子

CapillaryGelElectrophoresis

等电聚焦（CIEF）

IsoelectricFocsing

等速电泳（CITP）

Isotachoelectrophoresis

等电点差异 两性物质，蛋白

质富集浓缩

电泳迁移率和 离子化合物，富移动界面 集浓缩

何谓毛细管电色谱？

.毛细管电色谱(CEC