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抗菌抗病毒常用实验研究方法

细菌、病毒性疾病是目前国内外流行的重要传染病,特别是近两年来,由冠状病毒引起的SARS及由流感病毒引起的禽流感给动物及人类带来的严重危害,是人所共知的由于各种疫苗的不断出现,虽然一些细菌、病毒病已得到了有效的控制,但是其治疗尚无有效的解决方法因此研制高效、低毒的新型中药抗菌、抗病毒制剂已成为巫待解决的问题。

1、常用的抗菌方法

1、1稀释法

1、1、1试管稀释法

培养基内抗生素的含量按几何级数稀释并接种适量的细菌，经孵育后，观测能引起抑菌作用最低抗生素浓度，称最低抑菌浓度(MIC)为该菌对药物的敏感度。稀释法所获得的结果比较准确，常被用作校正其他方法的标准。如以下黄贝贝等的青钱柳抗菌作用的实验研究和黄利权等的火绒草的抗菌活性研究的实验方法:

1、应用试管稀释法,测定青钱柳提取物对实验菌的抑菌效果,检查不同浓度下青钱柳提取物对细菌、霉菌的抗菌作用。结果:青钱柳提取物在体外对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌等革兰氏阳性菌具有较强的抗菌作用;而对大肠埃希氏菌、铜绿假单孢菌等革兰氏阴性菌的抗菌作用不明显;对黄曲霉、烟曲霉等霉菌的抗菌作用不明显[1]。

2、采用试管稀释法,分别测定了火绒草水煎液、水提醇沉液、醇提物、醇提石油醚部分、醇提乙酸乙酯部分、醇提正丁醇部分、醇提水溶部分等7种提取物对大肠杆菌C83882、大肠杆菌C83903、大肠杆菌C83914、沙门氏菌C79-20、金黄色葡萄球菌NewbouldS-305、金黄色葡萄球菌临床分离株等6株病原菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。实验结果表白,火绒草醇提物及其石油醚部分和乙酸乙酯部分对两种金黄色葡萄球菌具有较强的克制作用,其MIC为0114mg/ml生药浓度,MBC为0127mg/ml生药浓度,而其它部分对金黄色葡萄球菌的克制作用较弱。火绒草醇提正丁醇部分和水溶部分对3株大肠杆菌和1株沙门氏菌具有较强的克制作用,其MIC为2170mg/ml生药浓度,MBC为2170mg/ml生药浓度,显示了较强的抗菌活性[2]。

1、1、2肉汤稀释法

以水解酪蛋白(M-H)液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待检细菌，定量测定抗菌药物克制或杀死该菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度(MBC)。

如刘菁菁的研究蓝玉簪龙胆对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体内外抗菌活性。蓝玉簪龙胆分别以乙醇、氯仿、正丁醇、蒸馏水提取，得到极性不同的4部分产物，运用肉汤稀释法测定其对MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)的最低抑菌浓度(MIC);体内实验部分:采用腹腔注射MRSA法建立小鼠感染模型，分别给予蓝玉簪龙胆水提液高、中、低剂量，银黄胶囊治疗15d，并与模型对照组比较，观测存活率。结果：体外实验:蓝玉簪龙胆各极性组分对MRSA和MSSA菌株均有不同限度的抑菌作用，其中正丁醇组分抑菌作用最强，另一方面为乙醇、水层组分;体内实验:除了蓝玉簪龙胆大剂量组，其余各治疗组存活率均高于模型对照组，而蓝玉簪龙胆中剂量组存活率最高。结论蓝玉簪龙胆对MRSA和MSSA均具有一定的抗菌作用，并且敏感性差异无显著性;对MRSA感染小鼠有一定治疗作用[3]。胡景玉等为了了解衡水地区大肠埃希菌的药敏情况，采用肉汤稀释法18种抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）并计算其MIC50和MIC90。结果亚胺培南、哌拉西林、他唑巴坦和头孢哌酮、舒巴坦显示良好的抗菌作用，其MIC50分别为0.5μg/ml、1μg/ml、0.5μg/ml；MIC90均为2μg/ml，其他药物显示不同限度的耐药，且大肠埃希菌产ESBLs的检出率较高。结论检出的大肠埃希菌存在多重耐药，仅对亚胺培南、哌拉西林、他唑巴坦和头孢哌酮、舒巴坦普遍敏感[4]。KianbakhtS等通过肉汤稀释法研究刺蒺藜不同部位（果、茎叶、根）的甲醇提取物对金黄色葡萄球菌ATCC29213、粪肠球菌ATCC29212、肠埃希氏菌ATCC25922、绿脓杆菌ATCC27853四种细菌的抗菌能力，研究结果表白：果、茎叶对四种菌的MIC值均为2mg/ml；根的甲醇提取物对MIC值对金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、肠埃希氏菌均为4mg/ml，对绿脓杆菌的MIC值为2mg/ml[5]。

1、1、3琼脂平板稀释法

将不同浓度的抗菌药物，分别加入到定量的琼脂培养基中，混匀，制成固体含药平皿，使每一个平皿中所含抗菌药物的浓度相差2倍，用多点接种仪把待测细菌点种到具有抗菌药物的琼脂培养基的表面上，在特定温度下培养适当时间后，平皿上无菌落生长的最低药物浓度为抗菌药物对受试菌种的最低抑菌浓度。每一次实验都应用标准菌株做质控。琼脂平板稀释法本法的特点是可同时进行大量菌