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CLSIMS新指南“M58”简介

阳性血培养的直接鉴定目前是被讨论比较多的话题，尽管该方法大幅缩短了报告时间并帮助临床实现了早期的最优抗感染治疗，但CLSI仍然认为该方法仍有其固有的局限性，而且目前市面上的MALDI-TOFMS产品在该项应用上并没有获得相关的法规认可，因此使用者必须对该方法获得的结果进行进一步的验证，或在进行该方法的同时，平行进行传统的方法（传代培养后鉴定）以进行验证。该方法的一个主要局限性在于无法鉴定多重感染的样本，当然如果通过革兰染色发现有多种病原菌的话就不能再使用该方法，而应传代分纯之后再鉴定。在进行MALDI-TOFMS分析之前，阳性的血培养首先应去除血液和培养基中的干扰蛋白，并富集细菌以保证足够的生物蛋白，目前常用的一些方法包括离心或者过滤来富集细菌，并通过清洗来进行纯化，使用一些溶血性的成分来破坏完整的红细胞。?关于阳性血培养样本的直接鉴定

血培养直接鉴定市场上有些品牌注册证。如果使用没有注册证的方法学，需要进行验证，作为实验室自开发测试。解读：BMX虽然没有血培养直接鉴定试剂注册证，但实验室只需对BMX推荐的方式进行验证即可使用。BMX推荐“次代培养”的方法，无额外成本，准确率更高。将报阳标本批次培养3小时，同时完成质谱靶板制备和药敏卡菌悬液的制备，而后结果自动传输到药敏系统及LIS。更节省实验室的工作流程，无手工传输鉴定至药敏设备的过程。关于阳性血培养样本的直接鉴定

2.1纯培养的单一菌落才是质谱鉴定准确率的关键。解读：任何MS鉴定混合菌说法无科学依据（与质谱鉴定基于图谱比较有关），由于有些产品数据库平均2.5株/种，且使用简单特征峰比对的算法，所以对于同一张图谱的比对存在大量可能性，导致给出10个结果让客户自选。10个结果传递给客户的错误信息是可鉴定混合菌。关于阳性血培养样本的直接鉴定

检测样本的制备在分离株的样本准备阶段，对于大部分的细菌而言，是可以通过直接涂靶板或者板上提取的方法来完成的，而某些具有复杂细胞壁成分的微生物，如分枝杆菌、丝状真菌等则需要更严格的提取方法来释放胞内蛋白。除此之外，对于有高度生物危害的微生物则必须分析前进行灭活，包括布鲁氏菌、鼠疫耶尔森菌、结核分枝杆菌、双相真菌等等。

1.2.4MALDI-TOF的局限性主要为有时不能获取高置信度的结果和相近微生物之间的区分,数据库和分析方法的改进是解决这一限制的重要因素。限制结果准确性的因素

当直接点靶的方法不能产生可接受的结果时，应该进行提取方法。解读：大部分MS需要复杂萃取流程，VitekMS只需在靶板上添加甲酸。提取要求

eDT:额外增加1ul70%甲酸Ext:加300ul纯净水加900ul乙醇13000转离心2分钟去上清重复离心去上清加30ul纯净水和70ul甲酸加等体积乙腈13000转离心2分钟将上清液涂靶板室温干燥加基质液

故障排除首先考虑样品制备和转移过程中的技术错误，其次考虑的就是靶板结构的完整性，如划痕、凹痕等。解读：重复靶板需要反复清洗，经年累月必然产生损耗，增加了故障发生率，降低了激光寿命。一次性靶板避免风险。（BMX是国内市场唯一有注册证厂家）关于故障排除

故障排除时首先采取的行动是重复分析。除了重新获取图谱，重新点靶外的一些系统可以使用替代数据库重新分析原始光谱数据。解读：BMX是唯一将临床和科研数据库分开的厂家，可以进新替代数据库重新分析。关于故障排除

当鉴定结果列出来自不同属的多个物种时，应进行补充试验以确定正确的属。当列出来自单一属的多个物种时，需要考虑物种水平鉴定的临床需要。解读：VitekMS给出唯一的诊断级种水平结果，无须考虑此问题。某产品给出的10个结果中可能存在多个1.7~2.0的结果，相当于报出多个属的结果。关于鉴定准确性

MALDI-TOFMS的数据库会进行更新，菌名也会进行更改。解读：只有IDAST是同一厂家提供才能避免两者兼容问题。某产品数据库升级或者菌名更改都存在与AST设备的衔接问题。同时，某些产品不同数据库细菌更名、升级需要收费。

部分密切相关的微生物的区分能力在临床上非常重要，可以提供预后信息及指导抗生素治疗。解读：VitekMS对诸如链球菌、分枝杆菌、丝状真菌等的鉴定能力得到多篇文献的支持。同菌属间鉴别能力主要取决于特征性相对较弱的小波峰。国际专利权重矩阵分析法将图谱分成1300个Bin进行比对分析，不遗漏每一个波峰。其次，梅里埃数据库由大量测序结果不同的菌株构建，平均15株/种。对于每一种菌的参照图谱最齐全，降低图谱与库内多个图谱近似的可