免疫学检测技术专家讲座.pptx

第十五章

免疫学检测技术

IMMUNOLOGICALTECHNIQUES;抗原-抗体反应

免疫细胞检测

免疫分子检测

免疫检测方法应用;抗原-抗体反应特点

抗原-抗体反应原因

抗原-抗体反应检测技术;1.高度特异性:抗体亲和力、交叉反应

2.可逆性：非共价结合（氢键、疏水键等）

亲和力；适当环境原因

3.百分比性：最适百分比才能可见

两阶段：

特异性结合阶段：抗原-抗体互补结合

可见反应阶段：大复合物;百分比性;1.抗原抗体性质：关键原因

抗体特异性、亲和力；抗原、抗体浓度

2.温度37℃最适温度

3.溶液pH值最正确6-8

4.电解质：抗原抗体等电点为pH3-5或4-6不等。使抗原抗体复合物失去电荷而聚集;三、抗原抗体反应检测技术

;（一）凝集反应（agglutination）**;玻片凝集试验：为定性试验，用于判定抗原，如菌;2.间接凝集反应(indirectagglutinationreaction);3.协同凝集反应(co-agglutinationreaction);（二）沉淀反应（precipitation）**;1.单向琼脂扩散（单扩）;免疫学检测技术;2.双向琼脂扩散试验（双扩）;3.免疫电泳;4.速率散射比浊法/免疫比浊法;(三)免疫标识技术;惯用免疫标识技术：;酶免疫测定法**

（enzymeimmunoassay，EIA）;1)酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）;包被一抗;12345678;生物素-亲和素系统-ELISA

（biotin-avidinsystem-ELISA，BAS-ELISA）;2)免疫组化技术（IMMUNOHISTOCHEMISTRYASSAY,IHC）;2.免疫荧光法**;直接免疫荧光与间接免疫荧光;激光共聚焦显微检测+IFA;3.免疫印迹技术(WESTERNBLOTTING);4.放射免疫测定

（RADIOIMMUNOASSAY,RIA）;5.化学发光免疫分析（CHEMILUMINESCENCEIMMUNOASAY,CLIA）;6.免疫胶体金技术

（IMMUNOGOLDLABELINGTECHNIQUE）;7.蛋白质芯片技术

（抗原芯片、

抗体芯片）;8.免疫PCR

（IMMUNO-PCR）;外周血单个核细胞分离

T、B淋巴细胞分离

淋巴细胞功效检测;;二、淋巴细胞及其亚群分离;利用表面标志分离淋巴细胞（淘选法）;（二）免疫磁珠法

（immunemagneticbead,IBM）;MACS微珠进行磁性标识;（三）荧光激活细胞分离仪分离法(FACS)

又称流式细胞术(flowcytometry,FCM）;免疫学检测技术;（四）抗原肽-MHC分子四聚体技术;抗原肽－MHC分子四聚体技术;三??免疫细胞功效测定;迟发型（IV型）超敏反应（DTH）检测

——皮试法，用于检测T细胞功效

原理：外来抗原刺激机体后，再用相同抗原做皮试。

阳性反应：皮试24~72小时出现局部红肿硬结（效应T细胞与特异性抗原结合作用后，引发以单核细胞浸润和组织损伤为主要特征炎症反应）;（二）细胞毒试验;DNAladders;（三）B细胞功效测定;（2)酶联免疫斑点测定（ENZYME-LINKEDIMMUNOSPOTASSAY,ELISPOT）检测B细胞产生抗体或者细胞分泌CK;（四）吞噬细胞功效测定;（五）细胞因子检测;第三节免疫学检测方法应用;

二、疾病诊疗

应用已知Ab（或Ag）检测未知Ag(或Ab），从而为感染性和

非感染性疾病提供诊疗或辅助诊疗;3.本身免疫病;三、免疫学监测;总结