(4.4)--液相色谱仪器分析.pdf

第十七章液相色谱法

§17-1概述

§17-2高效液相色谱仪

§17-3液相色谱法分类

§17-4液相色谱分离类型的选择

§17-5超高效液相色谱

17-1概述

一、高效液相色谱法的特点

1.高压：对载液施加15～30MPa，甚至高达50MPa

的高压。

2.高速：载液流速可达1～10mL·min-1，一般都小于

1h。

3.高效：可达5000～30000塔板/米。

4.高灵敏度：采用高灵敏度检测器，最小检测限可达

10-11g。

适用于有机及生化试样的高效分离分析方法

17-1概述

二、高效液相色谱与气相色谱的比较

1.分析对象不同：

气相色谱法:在柱温下具有足够的挥发度和热稳定

性的物质，因此只限于分析气体和沸点较低的化合

物及相对分子质量小于400的非离子型化合物。

高效液相色谱法:对试样的适用性广，不受分析对

象挥发度和热稳定性的限制，能分析相对分子质量

大于400的有机化合物。(生物大分子、天然产物、

高分子、离子型化合物）。

17-1概述

2.流动相不同：

气相色谱：流动相是惰性的载气，不参与分配过程，

它与组分分子没有亲和作用，仅起运载的作用；

液相色谱：流动相（载液）对组分分子有一定的亲和

作用，与固定相争夺组分分子，因而增大了分离的选

择性。

17-1概述

3.固定相不同：

气相色谱：填料粒度比较粗，常用柱填料目数为60～

140目，其颗粒直径为100～250μm，柱效为2000～

3000塔板/m，柱长一般为1～3m

液相色谱：填料粒度比较细，一般为3～10μm，形状

44

多为球形，柱效为3x10～8x10塔板/m，柱长一般

为0.05～0.5m

17-1概述

4.操作条件差异：

载液和载气性质不同而造成的差异：

（1）液相色谱在室温下操作，较低柱温有利于分离

5

（2）组分在载液中的扩散系数比在载气中小10倍

2

（3）载液粘度比载气粘度大10倍，必须采用高入口压

5.分离机理的异同：

均有吸附和分配色谱，不同的是液相色谱法还可以根据离

子交换作用或分子尺寸大小的差异而进行离子交换色谱和

空间排阻色谱分离。

17-1概述

6.色谱速率方程异同：

涡流扩散项：H=2ld

ep

分子扩散项：H=2gD/u流速大时可忽略

dm

传质阻力项：Hm

17-2高效液相色谱仪

17-2高效液相色谱仪

一、高压输液系统

贮液器：

用来贮存流

动相，由玻

璃、不锈钢

等制成。

17-2高效液相色谱仪

高压输液泵

压力：15～50MPa

压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀

17-2高效液相色谱仪

二、进样系统

流路中为高压力工作状态

通常使用耐高压的六通阀进样装置

流动相色谱柱流动相FA色谱柱