免疫细胞化学多媒体.pptx

;

第一节免疫细胞化学原理★

第二节免疫细胞化学方法

;;免疫反应特异性表现在：

抗原作为一类结构复杂大分子能刺激机体

产生对其特异抗体并与抗体发生反应

抗体针对某种抗原分子而产生，特异地识

别该抗原并与其结合

;免疫细胞化学反应原理：;;抗原;;;抗原：

凡能刺激机体产生抗体并能与

抗体特异结合物质称为抗原

抗原性：

物质所含有这种特征称为抗原性

;

细胞中含有抗原性化学成份有：

蛋白质多肽脂蛋白多糖

脂多糖糖蛋白核蛋白

这些生物大分子都能用免疫细胞化学技术检测吗?

从生物学功效来看都包含了哪些物质?

;

酶、受体、抗体、细胞外基质

激素、细胞结构蛋白、病原体等

;

;Fab片段含有抗体活性，决定某种抗体

与抗原结合能力和特异性;免疫细胞化学技术中所用抗体有两种：

抗血清—多克隆抗体，是用提纯抗原

免疫动物后从动物血清制备得

到

单克隆抗体—是指由单个产生特异抗体

Ｂ淋巴细胞分化增殖形成

细胞克隆产生抗体

;

;

免疫荧光技术将荧光素作为标识物

使组织细胞中形成抗原抗体复合

物在荧光显微镜下可见，从而显示

抗原物质定位

;１.异硫氰酸荧光素２.四乙基罗达明

３.四甲基异硫氰酸罗达明４.藻红蛋白

▲分子量不一样▲最大吸收光谱不一样

▲最大发射光谱不一样▲与蛋白结合方式不一样

▲展现不一样荧光：黄绿色荧光

橙色荧光

橙红色荧光等

;

荧光：

在激发光（荧光显微镜提供）照射下，能发出较激发光波长更长可见光并随照射停顿而消失

荧光显微镜：

荧光显微镜光源提供各种激发光，如

紫外光、蓝紫光（有不一样波长范围）

使受检标本内荧光物质发光

;

是将酶作为标识物使组织细胞中形成抗原抗体复合物得到标识，再经过酶细胞化学反应产生显微镜下可见显色物质，间接显示抗原物质定位

;1.反应产物定位准确，颜色对比清楚

2.反应后标本材料可长久保留

3.能用于电镜观察

;;;;;;;２.碱性磷酸酶（Alkalinephosphotase,AKP）;利用两种物质高度亲和力而相互结合定位特异分子

亲和物质含有多价能力物质，与亲和物质有高

度亲和力又能与抗体、蛋白质及各种标

记物(荧光素、酶、胶体金等)结合

最惯用亲和物质系统：

1、生物素（biotin）与亲和素（avidin）

二者结合能力为不可逆

2、葡萄球菌A蛋白与免疫球蛋白IgG

;

(1)标识亲和素－生物素技术

（Labeledavidinbiotin,LAB）

(2)桥式亲和素－生物素技术

（Bridgedavidinbiotin,BAB）

(3)亲和素－生物素-酶复合物技术

（Avidin-biotinperoxidasecomplex

method，ABC）;;;

利用亲和素为桥梁

连接生物素化抗

体和生物素化酶

;亲和素－生物素-酶复合物技术;葡萄球菌A蛋(StaphylocalproteinA,SPA)

◆是金黄色葡萄球菌