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黄河兰州段铬还原菌和对硝基酚降解菌的分离筛选及其在微生物燃料电池中的应用研究

1.引言

1.1黄河流域环境背景及问题阐述

黄河，作为中国的第二长河，拥有丰富的水资源和深厚的文化底蕴。然而，随着工业化和城市化的推进，黄河流域的水环境问题日益严重。特别是重金属污染和有机污染物，对生态环境和人类健康造成了极大威胁。兰州段作为黄河上游的重要部分，其环境问题不容忽视。

1.2微生物燃料电池简介

微生物燃料电池（MicrobialFuelCell,MFC）是一种利用微生物将有机物氧化成电能的装置。它具有清洁、高效、可持续等优点，被认为是未来能源技术的重要方向。同时，MFC在处理有机污染物和重金属污染方面也显示出了巨大潜力。

1.3研究目的和意义

本研究旨在分离筛选出黄河兰州段的铬还原菌和对硝基酚降解菌，并探讨其在微生物燃料电池中的应用。这将有助于解决黄河兰州段的水污染问题，为微生物燃料电池技术的实际应用提供科学依据，同时推动生物电化学技术在环境治理领域的进展。

通过这一研究，我们期望能够为黄河兰州段乃至整个黄河流域的环境保护提供一种新型、高效、绿色的治理手段。这不仅具有重要的环境价值，也对促进经济社会可持续发展具有深远的影响。

2黄河兰州段铬还原菌的分离筛选

2.1铬还原菌的分离与纯化

黄河兰州段水体中富含多种微生物，其中一些具有还原铬（VI）的能力。为了获得高效还原Cr（VI）的菌株，本研究采用富集培养法进行铬还原菌的分离与纯化。

首先，采集黄河兰州段水样，通过添加一定浓度的铬（VI）作为唯一电子受体，进行富集培养。经过多轮富集，逐步提高铬（VI）浓度，筛选出具有较高还原活性的微生物。随后，利用平板划线法对富集培养物进行分离，获得单菌落。通过多次传代培养，最终得到纯化的铬还原菌。

2.2铬还原菌的生理生化特性分析

对纯化的铬还原菌进行生理生化特性分析，包括生长温度、pH值、盐度等。研究发现，这些菌株在较宽的温度（15-40℃）、pH（5-9）和盐度（0-5%）范围内都能生长，表现出较强的环境适应性。

此外，对铬还原菌的代谢产物进行分析，发现其主要代谢产物为有机酸、氨基酸等，这些物质可能参与铬（VI）的还原过程。

2.3铬还原菌的分子生物学鉴定

为了进一步了解这些铬还原菌的种属信息，本研究采用16SrRNA基因序列分析进行分子生物学鉴定。对分离得到的菌株进行DNA提取、PCR扩增和测序。将测序结果与NCBI数据库进行比对，确定菌株的种属。

结果显示，本研究从黄河兰州段分离得到的铬还原菌主要隶属于假单胞菌属（Pseudomonas）、肠杆菌属（Enterobacter）和不动杆菌属（Acinetobacter）等。这些菌株具有潜在的铬污染治理能力，为后续微生物燃料电池的应用研究奠定了基础。

3.黄河兰州段对硝基酚降解菌的分离筛选

3.1对硝基酚降解菌的分离与纯化

对硝基酚（p-nitrophenol,PNP）作为一种典型的有机污染物，广泛存在于工业废水中，其生物降解性较差，对环境具有较大的毒害作用。本研究以黄河兰州段为采样点，采用选择性富集培养方法，以PNP为唯一碳源，进行对硝基酚降解菌的分离与纯化。

实验过程中，通过逐步提高PNP浓度，筛选出具有高效降解PNP能力的菌株。具体步骤如下：

初步筛选：将采集的黄河兰州段水样进行富集培养，以PNP为唯一碳源，观察菌株生长情况。

纯化培养：将初步筛选得到的菌株进行平板划线分离，获得单一菌株。

降解能力验证：对单一菌株进行PNP降解率测定，筛选出具有高效降解能力的菌株。

3.2对硝基酚降解菌的生理生化特性分析

对筛选得到的具有高效降解PNP能力的菌株进行生理生化特性分析，包括菌株的形态特征、生长温度、pH值范围、盐度等。

形态特征：通过光学显微镜观察菌株的细胞形态、排列方式等。

生长条件：测定菌株的最适生长温度、pH值范围以及盐度等。

代谢特性：分析菌株对PNP的降解途径，测定相关酶活性。

3.3对硝基酚降解菌的分子生物学鉴定

为明确筛选得到的对硝基酚降解菌的分类地位，采用分子生物学方法对其进行鉴定。

DNA提取：采用酚-氯仿法提取菌株的基因组DNA。

PCR扩增：以提取的DNA为模板，进行16SrDNA基因的PCR扩增。

序列分析：将获得的16SrDNA基因序列进行测序，与GenBank数据库中的序列进行比对分析，确定菌株的分类地位。

系统发育树构建：根据序列相似性，构建系统发育树，进一步明确菌株的亲缘关系。

通过对黄河兰州段对硝基酚降解菌的分离筛选及其生理生化特性与分子生物学鉴定，为后续其在微生物燃料电池中的应用研究提供了基础。

4铬还原菌和对硝基酚降解菌在微生物燃料电池中的应用研究

4.1微生物燃料电池构建与性能测试

微生物燃料电池（Microbial