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液相色谱基础知识

色谱原理ConcentrationinPhaseAK=DConcentrationinPhaseB

色谱原理固定相流动相高效液相色谱是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次的交换过程，它借助溶质在两相之间的分配系数、亲和力、吸附能力、离子交换、分子大小引起的排阻作用等差别使不同溶质进行分离（分离条件）。分离过程受溶质在两相的扩散系数、固定相填料的颗粒大小、填充密度、流动相组成及流速等因素影响。

色谱原理--分离过程ISDC

色谱参数--保留值保留时间t保R留体积V=t?RRF,死时间tM调整保留时间t`R=t-t调整保RM留体积V`=t`RR?F

?提高选择性—改变色谱峰的间距?提高柱效—改变色谱峰的宽窄

液相色谱分析基本概念液相色谱(LCorHPLC)——以液相为流动相的色谱，或流动相为液体的色谱。n液液色谱——以一种液体作流动相，另一种液体作固定相的色谱。nn液固色谱——以液体作流动相，以固体作固定相的色谱。（俄国植物学家）

液相色谱分析基本概念柱色谱——把固定相装在一根管子里（色谱柱），液体流动相流过色谱柱中的固定相。n

液相色谱分析基本概念平面色谱——纸色谱和薄层色谱(TLC:ThinLayerChromatography)。用滤纸或是涂在玻璃板（或铝箔）上的硅胶（或三氧化二铝等）作固定相，利用滤纸或硅胶层的毛细管作用把流动相（溶剂或叫展开剂）从底端吸上来，使混合物得到分离。n

液相色谱分析基本概念凝胶渗透色谱（GPC：GelPermeationChromatography）——是液相色谱的一个分支，以一定尺寸的多孔固体（凝胶）作固定相，以液体作流动相，按样品分子尺寸大小进行分离的方法。（类似于气相色谱的分子筛填充柱）主要用于测定样品中物质的分子量及分子量分布。（环境水样也如此，目前很多研究与此相关——消毒副产物、催化氧化、膜处理）。n

液相色谱分析基本概念超临界流体色谱（SFC：SupercriticalFluidChromatography）——以超临界状态流体作流动相，以固体或液体作固定相的色谱。超临界状态流体是指温度和压力都在超临界温度和超临界压力之上时，物质状态处于气体和液体之间，既不是气体也不是液体的一种特定形态的流体。超临界流体色谱类似于液相色谱，超临界流体由于其密度不同具有特殊的溶解各种物质的能力。n

液相色谱分析基本概念我们常用的液相色谱是指液固柱色谱。n

液相色谱仪的基本组成

ReservoirsVacuumpumpAutosamplerInjectionportSolvent1Solvent2Degasser1Degasser2PrecolumnMixingvesselFilterAnalyticalcolumnPressuregaugePulsedamperHighpressurepumpDetectortoMSTowasteSignalcollection

液相色谱—流动相单一溶剂：甲醇、乙腈、四氢呋喃、MTBE等或水。混合溶剂：2种以上混合溶剂，如甲醇-水、乙腈-水、乙腈-磷酸缓冲溶液、己烷-乙酸乙酯等。nn等强度洗脱：流动相组成和流量保持恒定。n

液相色谱—流动相梯度洗脱：流动相组成比列和流量随时间变化。需要比例阀、阀驱动器、溶剂比例控制器、梯度程序器。nn注意：1、溶剂需要带盖密封；2、溶剂需要脱气处理：搅拌下真空抽气或通入惰性气体（氦、氮）驱走其中的溶解气体。

液相色谱—高压泵有往复泵、注射泵、气体放大泵等，不锈钢材质，主要是要能克服大阻力以恒定流速输送流动相。n

PumpPurgevalvetomixingchambertowaste四元梯度泵--低压混合ABC比例D伐二元梯度泵--高压混合AB

PumpPPtt

液相色谱—进样阀进样阀是保证色谱分析准确度的重要部件。nn六通手动进样阀：罗达因（Rheodyne）进样阀：两个位置，一是取样，二是进样。有固定体积的进样定量环管，0.5-100ul之间，可根据样品情况更换选用。

Injectionport

液相色谱—进样阀自动进样器：模拟手动进样过程。nn注意：1、进样阀内部通道很细，不能带有固体颗粒，所以水样需要用滤膜过滤(0.45umor0.2um)；2、样品浓度不能太高，以免在进样阀内析出结晶；3、经常清洗进样阀通道。

Autosampler

液相色谱—自动进样样品架

液相色谱—色谱柱不锈钢材质、有柱管、接头和过滤片，柱管内填充几微米的小颗粒填料即固定相（当前仍以硅胶基质的填料占主导地位）。通常4-8mm、也有1-2mm的细管径分析柱，还有1mm以下的毛细管分析柱。n

液相色谱—色谱柱

液相色谱—色谱柱色谱柱填料的不断