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结核分枝杆菌H37Rv的β-内酰胺酶假说的分子克隆，超表达和生物

化学的特征

K.M.Nampoothiri,R.Rubex*,A.K.Patel*,S.S.Narayanan,S.

Krishna,S.M.DasandA.Pandey

印度,生物技术部，国家学科科学与技术学会（以前的区域研究实验

室），CSIR

杂志名称：JournalofAppliedMicrobiologyISSN1364-5072

影响因子：2.09

摘要

目的：分子克隆，和来自于结核分枝杆菌H37Rv基因组的基因的超表

达与生物学特征与β-内酰胺酶的活性有关。

方法和结果：对结核分枝杆菌H37Rv基因组的分析表明，Rv2068c，

Rv0406c和Rv3677c基因产物进行了预测，表现出β-内酰胺酶的活

性。这三个基因都用pET28a载体克隆然后在C41(DE3)大肠埃希菌细

胞中进行过量表达。加标记的重组蛋白被免疫印记法证实重组成功，

同时通过对头孢硝噻和其他的β-内酰胺类抗生素的水解反应证实这

些重组蛋白质具有β-内酰胺酶活性。所有重组蛋白的催化参数均由

酶的抑制试验所得出。用于重组菌株的抗生素敏感性试验显示其对不

同种类的β-内酰胺类抗生素抵抗性的增加。

结论：研究表明在结核分枝杆菌中可能有不止一个基因编码具有β-

内酰胺酶活性或类似β-内酰胺酶活性的基因，因此使得结核分枝杆

菌可以广泛抵抗β-内酰胺类抗生素。

这篇研究的重要性和影响性：系统化的关于结核分枝杆菌β-内酰胺

酶的假设研究，和相关的种类及β-内酰胺类抗生素的抑制试验可以

对于发展新的针对肺结核引起的多重耐药的药物抵抗菌株治疗的新

的抗生素很有帮助。

关键词：β-内酰胺酶，β-内酰胺类抗生素，结核分枝杆菌，头孢硝

噻

前言：

分枝杆菌菌株对于抗分枝杆菌药物的抵抗性的增加和结核病在现在

的死灰复燃都强调了寻找新的治疗结核病手段是非常迫切的。β-内

酰胺类抗生素可以抑制细菌中的转肽酶反应和阻止细菌细胞壁的合

成，所以是非常广泛的抗微生物制剂。然而大多数分支杆菌是天然抵

抗β-内酰胺类抗生素，大概是因为它们的非常疏水的细胞壁，虽然

其细胞质中存在青霉素结合蛋白但重要的是它同时存在β-内酰胺酶

催化水解β-内酰胺类抗生素的作用。大多数的结核分枝杆菌产生β-

内酰胺酶，在酶的结构上，分类上有不同，以及是否分泌细胞质或者

绑定细胞膜和关于是否其产物是可诱导或是构成的。对分枝杆菌β-

内酰胺酶的动力学研究大多与酶制剂不纯有关，或者与已推断间接的

关于β-内酰胺类抗生素和β-内酰胺酶抑制剂的合成物的药敏试验结

果有关。系统的研究结核分枝杆菌β-内酰胺酶和与其相关的种类，还

有对于相应的β-内酰胺类抗生素及其抑制剂的药物敏感性实验的研

究，有利于对新的抗生素制剂的发展。

来自结核分枝杆菌H37Rv的DNA文库的粘粒上的开放阅读框架和已

知的A类β-内酰胺酶具有同源性，该基因从结核分枝杆菌的染色体

上的DNA用PCR扩增出来，而且被Vloadri用大肠埃希菌中高表达。

重组酶的动力学与直接用pI是5.1和4.9从结核分枝杆菌中提取出来

的β-内酰胺酶相似，该重组酶主要表现出青霉素酶的活性。事实上，

作者也提出了第二个可能性，即一小部分的β-内酰胺酶也具有相对

较强的的头孢菌素酶活性。有相关报道说无毒的结核分枝杆菌H37Ra

的主要的β-内酰胺酶BlaA基因与Rv2068c中的BlaC基因的生物化

学结构完全相同。在耻垢分枝杆菌中的主要的β-内酰胺酶基因（Bla

S/BlaA,BlaE)与偶发分枝杆菌中的A级分枝杆菌中的BlaF基因生物

化学特征相似。这个结构说明BlaC具有成为用β-内酰胺类药物和β

-内酰胺酶抑制剂的混合剂治疗结核的潜在的作用靶点。对于分支杆

菌中β-内酰胺酶的详细分布和精确的特征是迫切需要阐述的，以便

用于评估未来在治疗肺结核中β-内酰胺类药物的作用角色。很少有

临床证据表明，β-内酰胺类抗生素与β-内酰胺酶抑制剂组合，如阿

莫西林-克拉维酸，氨苄西林-舒巴坦，该组合在结核分枝杆菌感染的

治疗过程起作用。

结核分枝杆菌基因组序列测定的完成，已经打开了通向治疗结核病的

新的途径。这篇研究说明了存在有不止两种的蛋白质，除了BlaC，

在结核分枝杆菌H3