SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量实验报告.pdfVIP

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SDS－PAGE测定蛋白质相对分子质量

一、前言

聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳，简称PAGE，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支

持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉

双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用

方法有两种:化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵(APS)为催

化剂，以四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂。在聚合过程中，TEMED催

化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙

烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。

PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，

连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场

作用下，主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成

分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不

仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰

度及分辨率均较前者佳。不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶

所组成。浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7

的Tris-HC