dna粗提取与鉴定导学案.pptx

第5单元DNA和蛋白质技术第1课时DNA的粗提取与鉴定

1.通过对植物或动物组织中的DNA进行粗提取,了解DNA的物理化学性质。2.理解DNA粗提取与鉴定的原理,掌握DNA粗提取技术。3.利用DNA的性质、细胞的特征和试剂的使用方法进行实验设计和操作。

1.提取DNA的方法(1)DNA的粗提取就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在①方面的差异,提取DNA,去除其他成分。?(2)DNA的溶解性:DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的②中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使③充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离目的?(3)DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性:④能水解蛋白质,但是对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受60~80℃的高温,而DNA在⑤以上才会变性。洗涤剂能够瓦解⑥,但对DNA没有影响。?2.DNA的鉴定:在⑦条件下,DNA遇⑧会被染成⑨。?一、基础知识NaCl溶液物理和化学性质80℃蛋白酶DNA细胞膜二苯胺蓝色沸水浴

二、实验设计1.实验材料的选取:选用⑩含量相对高的生物组织,成功的可能性更大。?2.破碎细胞,获取含DNA的滤液:动物细胞的破碎比较容易,以鸡血细胞为例,在鸡血细胞液中加入一定量的,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞,需要先用洗涤剂溶解。?3.去除滤液中的杂质:当氯化钠的物质的量浓度为___________时,DNA的溶解度最低,而蛋白质等会溶解,利用这一原理,可以使DNA在盐溶液中溶解或析出,从而达到分离。?DNA蒸馏水0.14mol/L1112细胞膜13

4.DNA的析出与鉴定:将处理后的溶液过滤,加入与滤液体积相等的、冷却的,静置2~3min,溶液中会出现,这就是粗提取的DNA。用玻璃棒搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸取上面的水分。取两支20mL的试管,各加入物质的量浓度为的NaCl溶液5mL,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解。然后,向两支试管中各加入4mL的。混合均匀后,将试管置于中加热5min,待试管冷却后,比较两支试管中溶液颜色的变化,看看溶解有DNA的溶液是否变。?酒精溶液1416白色丝状物17沿一个方向152mol/L二苯胺试剂18沸水19蓝20

1.为提取到DNA,曾先后使用不同浓度的NaCl溶液,请问在物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液及0.14mol/L的NaCl溶液中应取滤液还是滤得的固体物?答案：在物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液中DNA呈溶解状态,应取滤液;在物质的量浓度为0.14mol/L的NaCl溶液中DNA溶解度极低,易析出,应取滤得的固体物。

用鸡的血液提取DNA更好,因为鸡血细胞核DNA含量丰富,材料易得,而猪的红细胞无细胞核,DNA含量少。蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞涨裂,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂),从而释放出DNA。2.用猪的血液与鸡的血液提取DNA哪个效果更好?为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?答案：洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNA的释放;食盐有利于DNA的溶解。研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全,提取的DNA量少,影响实验结果,导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。3.加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?如果研磨不充分,会对实验结果产生怎样的影响?答案：

1.提取大分子物质的基本思路是怎样的?知识点一:提取DNA的方法提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。答案：

2.DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,尝试完成表中内容。试剂溶解情况DNA蛋白质物质的量浓度为2?mol/L?NaCl溶液物质的量浓度为0.14?mol/L?NaCl溶液酒精(体积分数为95%的冷酒精)溶解析出不溶溶解某些蛋白质可溶部分发生盐析

3.盛放鸡血细胞液最好用什么样的容器?为什么不宜用玻璃容器?盛放鸡血细胞液的容器最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附一部分,提取到的DNA就会