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单克隆抗体生产方式的比较

利用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞生产重组蛋白，占整个生物制药行业的70%以上。事实上，

CHO细胞生产的人源单克隆抗体(hMAbs)在诊断和治疗市场上发挥的重要作用已有数十年。

利妥昔单抗治疗非淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病和类风湿关节炎是首批获得

FDA批准的人鼠嵌合单克隆抗体之一。自1997年获得批准以来，已有数十种嵌合、人源化

和人单克隆抗体获得批准并进入临床使用。许多基于单抗的重磅治疗药物即将达到“专利期

限”。甚至，许多研发机构正在进行工艺开发和优化，竞相开发生物类似药。

图1:灌注培养用Repligen的ATF-2细胞截留装置-BioFlo320(右)，控制生物反应器(中)中的气体、pH值、DO和搅拌，Repligen

控制器(左)监控通过中空纤维截留装置的压力和交替切向流。

在所有药品工艺开发过程中，包括那些涉及CHO细胞生产的人源单抗，决定最佳工艺参数

和方法是基于成本、时间和表达量的比较而做出来的。通常，在最终工艺转移到中试或扩大

的实验室级别之前，要进行多管线平台测试。投入大量的研发时间和资金来提高产量，降低

成本，改进现有的生物反应器和生物工艺技术。我们研究项目的目标是用一个简单、实验室

规模工艺控制器比较分批、流加和灌流工艺（人员单抗生产的三种主要方法）。

在分批法中，所有营养物质都在初始基培养基中提供。流加法是在营养物质耗尽后添加营养

物质。灌注法是培养过程中不断灌注培养基，能同时清除废物、提供营养和收获产品。我们

比较了在生物反应器中保留细胞方式的两种不同灌注工艺。在一个装置中，我们使用了交替

切向流(ATF)过滤装置，它使用中空纤维过滤器来截留细胞。在第二个装置中，我们将细胞

置于生物反应器中，并将其固定在固体载体上。

材料和方法

我们用EppendorfBioFlo320生物工艺控制站控制所有的实验运行，比较了四种人源单抗产

品。需要注意的是，除了管道和马达，在单独的运行之间没有进行任何硬件更改。表1是四

个试验设置的概况。

细胞系和培养基

所有的实验都使用了悬浮CHO细胞系(来自TPGBiologics,Inc.)，该细胞系表达一种潜在的

人单抗生物仿制药。我们在CD-FortiCHO培养基中培养细胞，培养基中添加8mMl-谷氨酰

胺和1%Gibco抗结块剂(均来自ThermoFisherScientific)。我们在NewBrunswickS41iCO2

恒温培养箱中，用一次性带有挡板的聚碳酸酯摇瓶(VWRInternational)培养准备生物反应器

种子细胞，设置100rpm和5%CO2为温度，加湿。

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我们把一个含有密度为0.3×10个细胞/mL的冷冻管中的细胞，接种在一个125毫升的摇瓶

20%的培养基。每隔一天传代，一周后，我们将摇瓶的大小从125mL增大到

中，加入瓶体积

250mL，500mL，最后是1L来扩大培养体积，同时保持接种密度、培养液占摇瓶容积比

例，其它参数不变。用同样方法，我们在每个生物反应器中接种了解冻后相同代次和培养

时间的细胞。

设备

在批量实验中，我们使用了一个2-L的水夹套、能高压灭菌的Eppendorf设备。对于流加工

艺，，我们在EppendorfBioBLU5c一次性设备中培养细胞。对于ATF灌注实验中，我们通

过AseptiQuikfitting(0.375-in.来自ColderProducts公司的软管配件,图1)