铅锌污染土壤复合微生物修复剂及其制备方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN105039198A

(43)申请公布日2015.11.11

(21)申请号CN201510301441.X

(22)申请日2015.06.05

(71)申请人陕西省微生物研究所

地址710043陕西省西安市西影路76号

(72)发明人沈卫荣孙晓宇陈锐瞿佳赵玲侠韩丽萍路鹏鹏门欣

(74)专利代理机构西安新思维专利商标事务所有限公司

代理人黄秦芳

(51)Int.CI

C12N1/20

B09C1/10

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

铅锌污染土壤复合微生物修复剂及

其制备方法

(57)摘要

本发明涉及铅锌污染土壤复合微生

物修复剂及其制备方法。铅锌矿产开采的

尾矿和废弃矿石中的重金属通过降雨、风

化等表生地球化学作用向周边地区扩散，

对生态系统的结构与功能造成了巨大影

响。本发明通过专用液体发酵培养基分别

培养黄色微球菌PS5和不解糖假苍白杆菌

ZS2后，收集发酵液，离心分离除去发酵

液中的水，把离心获得的两种粘稠状菌体

充分搅拌混合均匀，获得浅黄色粘稠状菌

体细胞，加入甘油和硅藻土搅拌混合均

匀，获得淡黄色固体制剂即目的产品。本

发明通过微生物生物代谢将铅锌离子富集

钝化于细胞，并产生蛋白类生物可以结合

吸附金属离子增加降解效率，具有较好的

温度、pH等环境适应能力，修复后无化学

残留和二次污染。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.铅锌污染土壤复合微生物修复剂的制备方法，其特征在于：

包括以下步骤：

步骤一：发酵：

调节液体发酵培养基A的pH至6.0-6.5,并进行常规灭菌处理，按液体质量6-9%无

菌操作接入黄色微球菌PS5，恒定温度35±1℃，搅拌速度200-250rpm，通风量

0.27-0.30Msup3/sup/min，罐压0.07-0.08MPa，持续发酵72-76hr，显微镜检测

计数发酵液中细胞数达2.0×10sup9/sup个/mL时终止发酵；

调节液体发酵培养基B的pH至6.0-6.5，并进行常规灭菌处理，按液体重量6-9%

无菌操作接入不解糖假苍白杆菌ZS2，恒定温度35±1℃，搅拌速度200-250rpm，

通风量0.28-0.32Msup3/sup/min，罐压0.07-0.08MPa，持续发酵72-76hr，显

微镜检测计数发酵液中细胞数达2.0×10sup9/sup个/mL时终止发酵；

步骤二：菌体细胞分离：

分别收集步骤一液体发酵培养基A、液体发酵培养基B的黄色微球菌PS5、不解糖

假苍白杆菌ZS2的发酵液，用酵母分离离心机离心分离除去发酵液中的水，把离

心获得的两种粘稠状菌体充分搅拌混合均匀，获得浅黄色粘稠状菌体细胞；

步骤三：制剂制取：

在步骤二获得的浅黄色粘稠状菌体细胞中，按照菌体与甘油的体积比1:（0.6-1.1）

的比例加入甘油，并搅拌混合均匀，再按照菌体：硅藻土的体积比1：（1.1-1.4）

的比例加入细度为300目的硅藻土，搅拌混合均匀，获得淡黄色固体制剂即目的产

品。

2.根据权利要求1所述的铅锌污染土壤复合微生物修复剂的制备方法，其特征在于：

步骤一中的黄色微球菌PS5于2014年11月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委

员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.9929。

3.根据权利要求2所述的铅锌污染土壤复合微生物修复剂的制备方法，其特征在于：

步骤一中的不解糖假苍白杆菌ZS2于2014年11月6日保藏于中国微生物菌种保藏

管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.9930。

4.根据权利要求3所述的铅锌污染土壤复合微生物修复剂的制备方法，其特征在于：

步骤一