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α-互补:人工突变使大肠杆菌的β-半乳糖苷酶基因(lacZ)缺失N-端的第11-41位氨基酸,
而载体则携带有lacZ基因的N-端140个氨基酸和编码区段(lacZ’),二者单独存在时均无
功能,但共存于一个大肠杆菌细胞时则发生功能互补,形成具有完整活性的lacZ酶。
报告基因:是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容
易被鉴定的基因。
标记基因:是一种已知功能或已知序列的基因,能够起着特异性标记的作用。选择标记基因
用于鉴别目的DNA的存在,将成功转化了载体的宿主挑选出来;筛选标记基因:将携带了
外源DNA片段的重组子挑选出来。
cDNA文库:将生物某一组织细胞中的总的mRNA分离出来作为模板,在体外用反转录酶
合成互补的双链cDNA,然后连接到合适的载体上,并转入宿主细胞。这种方法所形成的所
有克隆的集合体叫cDNA文库。
侧翼序列:一条核酸单链上位于某一特定位置的5’或3’方向的序列。
Ct值:荧光信号达到阈值所对应的PCR循环数,它具有极好的重复性。
插入失活:当一段足够长的外源DNA片段插入到一个功能基因的编码区后,导致ORF移
码或提前终止,严重破坏原基因的编码能力而使该基因失活。
插入型λ载体:通过特定的酶切位点允许外源DNA片段插入的载体。
穿梭载体:能够在两类不同宿主中复制、增殖和选择的载体。主要是质粒载体,至少有2
套复制单元和2套选择标记,相当于两个载体的联合。
DNA聚合酶:是指以脱氧核苷三磷酸作为底物催化合成DNA的一类酶,它的主要活性是在具
备模板、引物、dNTPs等情况下催化DNA的合成及其相辅的活性。
DNA连接酶:DNA连接酶能催化双链DNA切口处的5′-磷酸根和3′-羟基生成磷酸二酯键。这
种反应需要供给能量,大肠杆菌和其他细菌的DNA连接酶以NAD作为能量来源,动物细胞和
噬菌体的连接酶则以ATP作为能量来源。
多重PCR:在一个反应体系中使用一对以上引物的PCR称为多重PCR。其结果是产生多个
PCR产物,用于检测特定基因序列的存在或缺失。
多克隆位点:载体序列上的一段人工合成的DNA序列,含有多个该载体唯一的限制内切酶
识别位点,以便载体与外源片段的重组。
发夹型杂交探针:又叫分子信标,是加入了荧光基团和淬灭基团的探针,但在结构上是环状
的寡核苷酸探针,由茎部和环部组成,其中茎由互补配对的序列组成,环与目的序列完成配
对,探针分子的两端分别标记荧光报告基团和荧光淬灭基团。
反向PCR:是用反向的互补引物来扩增两引物以外的DNA片段对某个已知DNA片段两侧
的未知序列进行扩增。(可对未知序列扩增后进行分析,如探索邻接已知DNA片段的序列;
用于仅知部分序列的全长cDNA的克隆,扩增基因文库的插入DNA;建立基因组步移文库。)
反转录酶:是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。
分子杂交:是指在分子克隆中的一类核酸和蛋白质分析方法,用已知标记的核酸分子或蛋白
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质分子检测混合样品中未知核酸分子或蛋白质分子,以及其相对分子量大小。
感受态:细胞处于能够吸收DNA的状态,称为感受态。
感受态细胞:处于能够吸收DNA状态的细胞。
核糖体位点结合(RBS):位于mRNA起始密码子及其正上游的一段区间,是核糖体结合并
起始翻译过程的位点。原核和真核的RBS显著不同。
基线:从第3个循环起到Ct值前3个循环止,其终点要根据每次实验的具体数据调整,一
般以3-15之间。
基因操作:指对基因进行分离、分析、改造、检测、表达、重组和转移等操作的总称。
基因的重叠性:单个DNA序列可编码一个以上的蛋白质,它们在结构上可以具有序列重复
性,也可以是相互完全不同的全新蛋白质。
基因工程:通过工具酶,在体外将目的基因、基因片段或其它DNA元件进行切割,与适当
的载体进行连接和重组,导入相应受体细胞,并使外源基因进行复制和表达,定向改造受体
生物性状或获得表达产物。
基因库:特定生物体全基因组的集合(天然存在)。
基因文库:由大量的含有基因组DNA的不同DNA片段的克隆所构成的群体。从特定生物
个体中分离的全部基因,这些基因以克隆的形式存在(人工构建)。
基因组文库:材料来自染色体DNA,含有全部基因组序列。任何器官、组织、细胞、任何
发育时期以及在任何环境下,基因组DNA是衡定的,所
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