冬小麦膨胀素基因EXPB7工程菌构建及纤维素水解作用分析(1).pptxVIP

冬小麦膨胀素基因EXPB7工程菌构建及纤维素水解作用分析汇报人：2024-01-25

CATALOGUE目录引言材料与方法冬小麦膨胀素基因EXPB7的克隆与表达工程菌对纤维素的降解作用研究工程菌在生物质转化中的应用探索结论与展望

01引言

膨胀素基因在植物生长发育中的重要作用：膨胀素基因是一类能够调节植物细胞壁松弛和扩展的基因，对植物的生长发育和抗逆性具有重要影响。冬小麦作为我国重要粮食作物之一，提高其产量和品质具有重要意义：冬小麦是我国主要的粮食作物之一，其产量和品质直接关系到国家粮食安全和人民生活水平。因此，研究冬小麦膨胀素基因的功能和作用机制，对于提高冬小麦产量和品质具有重要意义。工程菌在基因功能研究和应用中的优势：工程菌具有生长快、易培养、遗传背景清楚等优点，是基因功能研究和应用中的重要工具。通过构建含有目标基因的工程菌，可以方便地对基因进行表达、纯化和功能分析。010203研究背景和意义

膨胀素基因的研究进展近年来，随着分子生物学和基因工程技术的不断发展，膨胀素基因的研究取得了重要进展。研究人员已经成功克隆了多个膨胀素基因，并对其结构和功能进行了深入研究。工程菌在纤维素水解中的应用纤维素是地球上最丰富的可再生资源之一，但其结构复杂，难以被有效利用。工程菌在纤维素水解中具有潜在的应用价值，可以通过构建含有纤维素酶基因的工程菌，实现纤维素的高效水解和利用。发展趋势随着基因编辑技术和合成生物学技术的不断发展，未来膨胀素基因的研究将更加深入，工程菌在纤维素水解等领域的应用也将更加广泛。国内外研究现状及发展趋势

研究目的：本研究旨在构建含有冬小麦膨胀素基因EXPB7的工程菌，并分析其对纤维素的水解作用，为深入了解膨胀素基因的功能和作用机制提供理论依据。研究内容克隆冬小麦膨胀素基因EXPB7并进行序列分析；构建含有EXPB7基因的工程菌；分析工程菌对纤维素的水解作用；探讨EXPB7基因在纤维素水解中的作用机制。研究目的和内容

02材料与方法

纤维素底物适用于基因克隆和表达的质粒载体冬小麦膨胀素基因EXPB7的cDNA序列大肠杆菌DH5α感受态细胞分子生物学试剂和酶实验材料0103020405

基因克隆与表达载体构建将PCR产物与质粒载体进行连接，构建重组质粒。设计引物，以冬小麦cDNA为模板进行PCR扩增，获取EXPB7基因片段。实验方法

实验方法01将重组质粒转化入大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆。02工程菌的构建与诱导表达将阳性克隆进行扩大培养，提取质粒进行测序验证。03

010203将验证正确的重组质粒转化入表达宿主菌，构建工程菌。对工程菌进行诱导表达，获取含有EXPB7蛋白的菌体。纤维素水解作用分析实验方法

实验方法01准备纤维素底物，设置实验组和对照组。02将含有EXPB7蛋白的菌体加入实验组，对照组加入等量无菌水。03在适宜条件下进行反应，定时取样分析纤维素水解程度。

ABCD数据处理与分析对测序结果进行比对分析，验证重组质粒中EXPB7基因序列的正确性。对PCR产物进行电泳分析，确认目的基因片段大小。对纤维素水解实验数据进行统计分析，比较实验组和对照组的差异显著性。对工程菌表达产物进行SDS电泳分析，确认EXPB7蛋白的表达情况。

03冬小麦膨胀素基因EXPB7的克隆与表达

123设计特异性引物，以冬小麦cDNA为模板进行PCR扩增，获得EXPB7基因的全长序列。将PCR产物进行凝胶电泳分离，切胶回收目的片段，并进行测序验证。将测序正确的EXPB7基因片段与表达载体进行连接，构建重组质粒。基因克隆与测序

基因表达载体的构建与转化选择合适的表达载体，如pET系列载体，将重组质粒转化入大肠杆菌感受态细胞中。通过菌落PCR和质粒DNA酶切验证，筛选阳性克隆。将阳性克隆进行扩大培养，并提取质粒DNA，用于后续的转化和表达分析。

01将重组质粒转化入表达宿主菌，如BL21(DE3)等，构建工程菌。02在不同诱导条件下（如IPTG浓度、诱导温度和时间等），对工程菌进行诱导表达。03通过SDS和Westernblot等方法，检测EXPB7蛋白的表达情况。04对表达的EXPB7蛋白进行纯化，并测定其浓度和活性。工程菌的构建与表达分析

04工程菌对纤维素的降解作用研究

在规定条件下，每分钟从浓度为1%的羧甲基纤维素钠溶液中释放出1μmol葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位（U）。纤维素酶活力单位的定义采用DNS法测定还原糖的含量，以葡萄糖为标准品制作标准曲线，根据标准曲线计算样品中还原糖的含量，从而计算出纤维素酶的活力。纤维素酶活力测定方法纤维素酶活力的测定

工程菌对纤维素的降解效果分析降解率的计算通过测定工程菌处理前后纤维素的质量变化，计算纤维素的降解率。影响因素的分析研究温度、pH值、底物浓度等因素对工程菌降解纤维素