- 1、本文档共16页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
生化实验报告
实验一过氧化物酶同工酶的分离提取
一、实验目的
1、初步掌握蛋白质分离纯化的一般步骤,熟悉
离心的使用及蛋白质提取中的注意事项。
2、了解过氧化物酶的作用。
二、原理:
过氧化物酶是植物提内普遍存在、活性较高
的一种酶,它与呼吸作用、光合作用及生长素的
氧化等都有密切关系,在植物生长发育过程中,
它的活性不断发生变化,因此测定这种酶的活
性,可以反映某一时期植物体内代谢的变化。
本实验以苜蓿种子为材料,低速离心去除细
胞碎片,上清用丙酮或硫酸铵沉淀得过氧化物酶
同工酶粗品。
三、实验材料、器材及试剂:
(一)材料:苜蓿种子
(二)器材:研钵、超声波粉碎仪、高速冷冻
离心机酸度计
(三)实验试剂:
1.丙酮
2.提取缓冲液PBS。
四、实验步骤
1.精确称取4g左右植物样品(若是苜蓿种
子,提前用水溶胀好,)加15ml提取缓冲液匀浆;
[先将种子称好研碎,再逐渐加入提取缓冲液,
匀浆用去10ml,最后洗涤用5ml]
2.13000g离心10min;
3.取清液(量体积),沉淀弃去(清液少许
低温保存测定酶活和含量样1);
2
3
蛋白质浓度范围内(1~1000μg),蛋白质
与色素结合后在595nm吸光值的大小与蛋白质
的浓度呈正比,故可用于蛋白质的定量测定。
考马斯亮蓝G-250与蛋白质的结合十分迅
速,2min左右即可达到平衡,其结合物在室温
下1小时内保持稳定。此法灵敏度高,易于操作,
干扰物较少,是一种比较好的定量方法。其缺点
是在蛋白质浓度太高时线形偏低,且不同来源蛋
白质与色素的结合状况有一定差别。
三、实验材料、试剂和仪器设备
(一)材料
苜蓿种子
(二)仪器设备
722分光光度计烧杯量筒移液管具
塞刻度试管
(三)试剂
1.标准牛血清白蛋白溶液(100μg/ml)。
2.考马斯亮蓝G-250:
四、实验步骤
(一)标准曲线的绘制
取6支具塞刻度试管,按下表依次加入标准
蛋白,向各管中加入考马斯亮蓝G-250溶液5ml,
4
摇匀,放置5min左右,用1cm的比色皿在595nm
处测定吸光值,以蛋白的μg作纵坐标,吸光值
为横坐标绘制标准曲线。
表绘制标
准曲线各试剂加入量
管号123456
标准蛋白质(ml)00.10.20.30.40.5
蒸馏水(ml)1.00.90.80.70.60.5
换算出的每管的
标准蛋白质(μg)01020304050
(不用加)
(二)样品的测定
取7支具塞刻度试管,空白1支,其它6支
分别加入实验一的3、5、6步骤中的样品(每一
样品2个平行样)0.1ml,各加用蒸馏水0.9ml,向
各管中加入考马斯亮蓝G-250溶液5ml,充分摇
匀,放置2min左右,用1cm的比色皿在
文档评论(0)