ffpe组织rnascope荧光检测样品制备与预处理一部分.pdfVIP

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FFPE组织的RNAscope荧光检测的样品与预处理

简介

本技术说明为使用RNAscope®荧光多重试剂盒（货号320850）检测的福尔固定、石蜡包埋（FFPE）组织的和预处理

提供了指南。所需的RNAscope®预处理试剂是RNAscope®抗原修复试剂和蛋白酶III（RNAscope通用型预处理试剂盒，货号

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322380）。注意：我们推荐使用RNAscope蛋白酶III处理人的标本，对小鼠组织或细胞样本，如果蛋白酶III不能获得最优化的结果，研

究者可使用蛋白酶IV。请安全说明书（SDS），按照操作说明进

行操作。

工作流程可选择的停止点3：可在空气中室温干燥过夜（必需

第1部分：切片的在24小时内使用），或直接进行下一步。

组织切片

1.新鲜取材的组织在新鲜的10%NBF中室温第2部分：组织预处理

（RT）下固定16-32小时。材料准备：

2.脱水，石蜡包埋，将样本切成5+/-1µm的切片。1.把载玻片浸入70%乙醇中，室温孵育2分钟。

将切片粘附到Superfrost®Plus载玻片上。重要！任何时候不要让细胞变干。总是使用足够的溶

液浸没所有的细胞。

可选择的停止点1：在3个月内使用切片。室温条件

下使用干燥剂保存切片。2.去掉70%乙醇，更换为50%乙醇。室温孵育2分钟。

3.去掉50%乙醇，更换为1×PBS。室温孵育10分钟。

烘烤切片

制作疏水屏障

1.在60℃干燥箱内烘烤切片1小时。

1.调节HybEZ™杂交炉至40℃。

可选择的停止点2：在1使用切片组织。室温条

2.把浸湿的增湿纸放到湿盒中，把HybEZ™载玻片

件下使用干燥剂保存切片。

架放到实验台上。把盖好盖子的湿盒到杂交炉内，

关闭杂交