未知肠道杆菌的分离鉴定程序课件.pptVIP

标本中未知肠道感染细菌的分离鉴定程序

脓血便、肛拭子标本SS平板,中国兰,EMB平板选择/鉴别培基克氏双糖铁培养基,动力-靛基质-尿素半固体琼脂培血清学鉴定养基生化反应玻片凝集试验

标本中未知病原性球菌的分离鉴定程序

直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性观察菌落性状、溶血性、色素标本血琼脂平板涂片、染色、镜检生化反应测定挑取可疑菌落纯培养致病性测定血液肉汤增菌培养（凝固酶、耐热核酸酶）涂片染色镜检脑脊液

设计性实验临床标本中病原菌的分离与鉴定

设计性实验1.脓汁标本：脓拭子培养基：血琼脂平板其他：3%HO、兔血浆、生理盐水、革兰染液、玻片等222.痰标本：咽拭子培养基：血琼脂平板其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等

3.尿标本：尿液培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等4.粪便标本：肛门拭子培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺菌多价血清、玻片等

脓拭子分离培养（血平板）革兰染色革兰染色触酶实验血浆凝固酶实验

咽拭子分离培养（血平板）革兰染色胆汁溶菌试验奥普托辛试验革兰染色荚膜染色（石炭酸复红单染）

尿液离心沉淀1500转，10分钟分离培养（EMB平板）革兰染色克氏双糖铁斜面培养基--动力靛基质尿素半固体琼脂培养基革兰染色观察结果观察结果观察结果完成靛基质试验

肛门拭子1/2EMB平板克氏双糖铁斜面培养基动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基观察结果观察结果完成靛基质试验玻片凝集试验

培养基原理1.EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基）组成：无糖培养基＋乳糖＋伊红＋美蓝底物指示剂、抑菌剂原理：细菌分解乳糖产酸：伊红＋美蓝紫黑/紫红结果：分解乳糖细菌菌落变黑，有金属光泽菌落无色、半透明（粉色）不分解乳糖细菌

EMBagar

2.靛基质试验（吲哚试验）组成：蛋白胨水＋色氨酸原理：分解某些细菌有色氨酸酶玫瑰吲哚（红色）色氨酸吲哚（无色）＋柯氏试剂结果：液面形成玫瑰红色

吲哚试验

3.克氏双糖铁斜面培养基反应试验组成：无糖培基＋1份葡萄糖＋10份乳糖＋铁盐＋酚红营养底物底物底物指示剂原理：只分解葡萄糖产酸（葡萄糖少，产酸量少）上层氧化呈红色下层缺氧不氧化呈黄色分解葡萄糖＋乳糖产酸（乳糖多，产酸多）上下层均为黄色培养基成黑色产生HS＋铁盐FeS2

Doublesugerironslant

4.尿素培养基组成：基础培基＋尿素＋酚红底物指示剂原理：有些细菌产生尿素酶结果：分解尿素产氨分解尿素培基变红培基不变色不分解尿素

Ureaslant

肥达试验(4人/组)材料：病人未知血清：1#，2#，3#菌液：O、H、PAH、PBH（已知Ag）每组1块多孔板，标记每人2支吸管

123456OAgHAgPAHPBH

方法弃0.5ml于消毒缸120.50.51:4030.50.51:800.5456NS（ml）0.50.51:200.50.51:1600.50.50.51:3200.50.5未知血清(1:10)菌液(摇匀)(4种，1种/人)0.50.50.51:401:801:1601:3201:640(阴性对照)37℃水浴过夜

肥达试验§H凝集：絮状，以疏松大团沉于管底§O凝集：颗粒状，以坚实凝片沉于管底§凝集程度的判定以“＋”、“－”号表示＋＋＋＋上清完全透明，细菌全部形成凝集块＋＋＋细菌绝大多数凝集，液体有轻度混浊＋＋50％细菌形成凝集，液体半澄清＋－仅少数细菌凝集，液体比较混浊液体均匀混浊，无凝集（沉于管底，形成圆形沉淀，边缘整齐）

肥达试验§以呈现＋＋凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价1234561:401:801:1601:3201:640对照OH+++++++++++++++++-++---------PAH++PBH++----

肥达反应12345O1:1601:3201:1601:401:40H1:3201:801:801:801:320PAH1:40-1:3201:801:320PBH-1:801:801:401:320PCH---1:40-伤寒伤寒早期副甲阴性回忆反应／疫苗接种

肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）材料1.菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物2.伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水方法生理盐水血清