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一株白僵菌菌株的分离鉴定培养及致病力研究

一、摘要

本研究从自然界中分离得到一株具有较强致病力的白僵菌菌株，并对其进行了分离鉴定、培养及致病力研究。通过形态学观察、分子生物学技术和动物感染实验，对菌株的形态特征、遗传特性和致病性进行了深入研究。该菌株为白僵菌属一新种，具有较强的致病力和广泛的宿主范围。本研究为害虫的生物防治提供了新的思路和方法，同时为白僵菌的深入研究和应用提供了重要的理论基础。

二、内容概述

本研究旨在从自然界中分离筛选出一株具有高致病力的白僵菌菌株，为真菌杀虫剂的研发和应用提供理论依据。研究内容主要包括白僵菌菌株的分离、鉴定、培养以及致病力的探讨。

我们从多种昆虫标本和土壤样品中采集样本，经过初步分离纯化，得到多株真菌菌株。通过形态学观察、分子生物学技术等手段对菌株进行鉴定，最终筛选出具有强致病力的白僵菌菌株。

我们将筛选出的白僵菌菌株在适宜的培养基上进行了生长特性研究，包括菌丝的生长速度、产孢量以及温度、湿度等环境因素对其生长的影响。通过这些研究，我们初步掌握了该菌株的生长特性，为其在农业生产中的广泛应用提供了基础。

为了评估白僵菌菌株的致病力，我们选用了常见的昆虫宿主，如家蚕和玉米螟幼虫作为实验对象。通过对菌株与宿主的共培养实验，我们发现该菌株能够侵染宿主并引起典型的真菌病害症状。我们还通过室内接种、田间试验等方法进一步验证了菌株的致病力。

在研究过程中，我们还关注了白僵菌菌株与其他昆虫病原菌的相互作用，以期为真菌杀虫剂的研发提供新思路。通过对比分析，我们发现该菌株具有独特的竞争优势，为其在自然界中的生存和传播提供了可能。

本研究成功分离鉴定了一株具有高致病力的白僵菌菌株，并对其生长特性和致病力进行了深入研究。这些研究成果不仅为真菌杀虫剂的研发和应用提供了重要依据，还为今后进一步研究白僵菌与昆虫之间的互作关系奠定了基础。

三、材料与方法

本实验选用了具有较强抗真菌活性的白僵菌（Beauveriabassiana）作为研究对象。在实验室内，将该菌株接种于PDA培养基上，并在25条件下培养7天，以获得成熟菌株。在实验过程中，使用无菌水制备菌悬液，并设置对照实验。

采用组织分离法对白僵菌菌株进行分离。取适量菌落边缘的菌丝体，用无菌手术刀剪取约1cm大小的组织块，放入含有50mLPDA培养基的试管中。然后将试管倒置，放置在28恒温培养箱中培养34天。待菌丝体长出后，挑取单产孢子囊进行纯化培养。

根据《真菌鉴定手册》和《真菌分类学》，对纯化后的菌株进行形态学鉴定。观察菌落特征、菌丝体和分生孢子的形态，并进行分子生物学鉴定。提取菌株基因组DNA，利用通用引物进行PCR扩增，得到ITS序列。将扩增得到的ITS序列提交至GenBank数据库，与已知白僵菌菌株的ITS序列进行比对，从而确定菌株的分类地位。

将纯化后的菌株接种到PDA培养基中，在28条件下培养7天。每天观察菌落的生长情况，包括菌落大小、颜色、质地等。待菌株生长稳定后，取适量菌丝体研磨成匀浆，加入适量的生理盐水制成菌悬液。将菌悬液涂布于PDA平板上，28条件下培养34天，观察菌落的生长情况。

采用菌饼法进行致病力测定。将纯化后的菌株接种到PDA培养基中，28条件下培养7天，收集菌丝体并制成菌饼。将菌饼放在无菌的PDA平板上，然后用无菌针扎出多个小孔。每个孔内接种10L菌饼悬液，盖上平板并标记。将平板置于28条件下培养34天，观察菌斑的大小和形状。根据菌斑面积和菌丝体的生长情况，评价菌株的致病力。

经过分离、鉴定和培养，成功获得了具有较强抗真菌活性的白僵菌菌株。该菌株在PDA培养基上生长迅速，菌落呈白色、光滑、湿润、边缘整齐。形态学鉴定结果显示，该菌株属于白僵菌属。分子生物学鉴定结果表明，该菌株的ITS序列与已知白僵菌菌株的ITS序列具有较高的相似性。致病力测定结果显示，该菌株对多种植物病原真菌具有较强的抑制作用，且致病力较强。

1.白僵菌菌株的采集与分离

白僵菌（Beauvau）是一种广泛分布的真菌，能够引起植物的白僵病，对多种植物造成危害。为了更好地了解白僵菌的生物学特性和致病机制，本研究对一株白僵菌菌株进行了采集与分离。本文将详细介绍白僵菌菌株的采集与分离过程。

采样地点与时间：本实验于2019年6月至2020年6月在吉林省不同地区的植物上采集白僵菌菌株，以保证样本的代表性。

采样方法：在发病植物附近地面收集被真菌污染的土壤，然后挖深约1520cm的沟，将含有白僵菌菌落的土壤放入沟中，覆土并浇水，保持湿度。

菌株分离：将收集到的含有白僵菌菌落的土壤倒入灭过菌的平皿中，用无菌水稀释后，分别涂布在PDA平板上。置于28恒温培养箱中培养，待菌落长出后，根据菌落形态、颜色等特征进行初步筛选。

接种与培养：从初步筛选得到的白僵菌菌落中，挑选具有典型特征的菌株，