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赛默飞UltiMate3000高效液相色谱仪操作及维护保养规程
一、操作规程
1.流动相的准备。按照分析方法配制或准备流动相，用0.45μm微孔滤膜过滤后，超声脱气5分钟。将流动相放置在液相色谱溶剂盘中,将A、B、C泵吸液管分别放入甲醇、超纯水和缓冲盐溶剂瓶底部。
2.开机。在仪器背面从上到下依次打开泵、进样器、柱温箱和检测器单元的电源开关，打开电脑，等待约1～2分钟，变色龙服务管理器将会自动启动（或双击电脑右下角的变色龙软件的服务管理器，点击“启动仪器控制器”激活服务管理器）。双击电脑桌面的“Chromeleon7”图标，进入变色龙软件。
3.管路排气。向上掀开最上层泵单元前面板，拧松金黄色快速清洗阀（逆时针两圈左右），在软件中设置A通道比例为100%（其他通道比例设置为0）,然后点击“冲洗”，泵将以3.0mL/min的速度自动快速冲洗泵管内残留的气体，2min后将自动停止，观察流动相应连续、无气泡。同样设置需要使用的B、C泵通道比例为100%进行管路冲洗排气，冲洗结束停泵后，关闭（拧紧）清洗阀。
4.运行仪器。点击Pumpmodule，设置流速1.0mL/min，设置流动相A:C=40:60（设置C通道为60%），点击“马达”启动泵。点击“UV”，设置波长230nm，点击“氘灯”打开光源。
5.创建方法。在“创建”菜单中点击“仪器方法”，设定运行时间5min，在“诊断通道”项下点击“取消选择所有通道”，点击下一步。pump常规设置按默认值，点击下一步。在pump流速梯度窗口，点击“删除平衡阶段”，设置流速为1.0mL/min，流动相A:C=40:60，点击下一步。Sampler常规设置按默认值，点击下一步，进样模式按默认值，点击下一步。在温度控制窗口，不设直接点击下一步。在UV通道窗口，设置1通道波长为230nm即可，点击下一步直至完成。点击左上角“保存”，将方法保存在Chromeleon7下班级名称文件夹中，以组号及测定物质名称命名。
6.创建处理方法。在“创建”菜单中点击“处理方法”，选择基本定量，点击下一步，输入方法名称并保存至班级文件夹下，点击完成。
7.创建序列。在“创建”菜单中点击“序列”，在进样名称的格式栏中输入样品名称（苯甲酸标准或果汁样品），样品数设2，进样次数设1，开始位置RA1，进样量设20uL，点击下一步。点击浏览，选择前面所建立的仪器方法和处理方法，用作新建样品序列的分析。点击下一步，输入序列名称并保存至班级文件夹下，点击完成。
8.测定。在自动进样器红色样品盘中的RA1和RA2位置分别放入标准和样品溶液瓶。在左侧导航区下方点击仪器，点击工具栏的“监视基线”，在弹出的“选择监视通道”窗口勾选所需的监视波长和通道，待基线平稳后，点击“自动校零”，点击工具栏的“停止”，停止基线采集。在左侧导航区下方点击数据（或选中新创建的序列），按照实际放入样品盘的待测溶液修改样品名称和类型（1号为标准，2号为样品），点击“开始”，系统自动按顺序进样分析。如需添加样品，可点击“单击这里可添加新的进样”。
9.记录数据。在左侧导航区下方点击数据，打开刚运行的序列，双击序列数据表格第一列UV下方对应的色谱图，记录目标峰的保留时间和峰面积，如自动积分不正确，可利用手动积分删除峰，再进行手动积分处理。
10.关机。分析结束后，关紫外灯。如流动相中含有缓冲盐，则设置流动相甲醇:水=5:95，冲洗色谱柱30min，然后用100%甲醇冲洗30min。停泵，关闭软件，从下到上依次关闭各单元电源，关闭计算机，填写仪器使用记录。
二、日常维护保养
1.保持贮液瓶清洁，对专用贮液瓶应定期清洗；用试剂瓶作贮液瓶时，要经常更换。定期（如半个月）在稀硝酸溶液中超声、清洗过滤器，保持过滤器畅通无阻。
2.使用HPLC试剂和新蒸二次蒸馏水作流动相，所使用的溶剂其截止波长一定要低于检测波长，对不是HPLC级的试剂要进行过滤（HPLC试剂出厂前已用0.02μm滤膜过滤）。对流动相一定要脱气。
3.流动相使用不要超过两天，尤其是夏天，最好每天新鲜配制以免微生物的生长。腐蚀性溶剂或缓冲液在泵内存放不可过夜，否则溶剂会对泵起腐蚀作用。使用腐蚀性物质后要冲洗，先用水后用甲醇。
4.每天开始使用仪器，注意放空排气，确保泵头、流动池以及其它流路系统中无气泡存在。
5.珍惜保护色谱柱，避免柱头突然产生大的波动，扰动损伤柱床。如避免泵启动过速、升压过快、样品阀搬动过慢所造成的柱压大的波动。
6.采用保护（警戒）柱，延长柱寿命。如污染物堆积于保护柱柱头，造成柱压升高，柱效下降，峰形变差时，卸下用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。
7.避免超负荷进样，对250×4.6mm的柱子,绝对进样量应不超过100μg。在灵敏度允许的前提下，应尽量将试样浓度降低，减少绝对进样量（
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