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一株MDBK细胞的低血清悬浮驯化研究汇报时间：2024-01-20汇报人：

目录研究背景与目的实验材料与方法结果与讨论驯化过程中关键因子探究悬浮驯化后MDBK细胞特性分析总结与展望

研究背景与目的01

01MDBK细胞来源牛肾细胞系，广泛应用于生物医学研究。02特性贴壁生长，对培养条件敏感，常用于病毒培养和分离。03应用领域疫苗生产、基因工程、细胞生物学研究等。MDBK细胞简介

低血清悬浮驯化意义降低成本提高效率适应工业化生产悬浮培养可提高细胞增殖速度和病毒产量。悬浮培养更易于实现大规模、自动化生产。减少血清用量，降低培养基成本。

01研究目的02预期成果通过驯化使MDBK细胞适应低血清悬浮培养条件，提高细胞增殖速度和病毒产量。获得一株能够在低血清悬浮培养条件下稳定生长的MDBK细胞系，为工业化生产提供基础。同时，通过对比实验验证驯化后细胞的生长特性和病毒产量，为进一步优化培养条件提供理论依据。研究目的与预期成果

实验材料与方法02

来源于牛肾，具有贴壁生长特性。MDBK细胞株使用含10%胎牛血清的DMEM培养基，于37℃、5%CO2培养箱中培养。培养条件细胞株来源及培养条件

010203选择DMEM作为基础培养基，去除原有血清。基础培养基分别添加0.5%、1%、2%、4%的胎牛血清，形成浓度梯度。血清浓度梯度设置根据实验需求，添加适量的生长因子和其他必需添加剂。生长因子及添加剂低血清培养基配方优化

03细胞传代与扩增在悬浮培养过程中，定期进行细胞传代与扩增，以保持细胞活力。01细胞适应期将贴壁生长的MDBK细胞逐渐转移至低血清培养基中，使其逐渐适应悬浮生长环境。02悬浮培养条件使用优化的低血清培养基，于37℃、5%CO2培养箱中进行悬浮培养。悬浮驯化方法及过程描述

细胞生长曲线绘制通过定期计数细胞数量，绘制细胞生长曲线，以评估不同血清浓度对细胞生长的影响。细胞活力检测采用MTT法或台盼蓝染色法等方法检测细胞活力，以评估悬浮驯化过程中细胞的健康状态。数据统计与分析使用Excel或SPSS等统计软件对数据进行处理和分析，比较不同实验组之间的差异显著性。数据分析与处理方法

结果与讨论03

生长曲线绘制通过连续7天的细胞计数，成功绘制了MDBK细胞在驯化前后的生长曲线。生长速度比较驯化后的MDBK细胞生长速度显著快于驯化前，表明细胞适应了低血清悬浮环境。倍增时间计算根据生长曲线，计算得出驯化后MDBK细胞的倍增时间较驯化前缩短。细胞生长曲线测定结果030201

细胞形态变化驯化后的MDBK细胞呈现出更圆的形态，细胞间连接减少，表明细胞逐渐适应了悬浮生长。细胞大小比较通过显微镜观察发现，驯化后的细胞大小略小于驯化前，可能与低血清环境导致的营养限制有关。细胞活力评估采用台盼蓝染色法评估细胞活力，结果显示驯化后细胞活力高于驯化前。形态学观察结果分析

LDH释放量比较检测细胞培养上清液中的LDH释放量，结果显示驯化后LDH释放量减少，表明细胞膜完整性得到改善。葡萄糖消耗量分析测定培养液中的葡萄糖消耗量，发现驯化后MDBK细胞的葡萄糖消耗量增加，表明细胞代谢活跃。MTT法检测结果通过MTT法检测细胞代谢活性，发现驯化后MDBK细胞的代谢活性显著高于驯化前。代谢活性检测结果讨论

123提取驯化前后MDBK细胞的RNA，并进行质检，确保RNA质量符合后续实验要求。RNA提取与质检通过RT-qPCR技术检测驯化前后基因表达差异，筛选出一系列与细胞生长、代谢和凋亡相关的差异表达基因。差异表达基因筛选对差异表达基因进行功能注释和富集分析，发现这些基因主要参与细胞周期调控、物质代谢和信号转导等生物学过程。基因功能注释与富集分析驯化前后基因表达差异分析

驯化过程中关键因子探究04

血清浓度与细胞活力关系在较低血清浓度下，MDBK细胞的活力受到显著影响，表现为细胞凋亡和坏死比例增加。血清浓度与细胞周期分布低血清浓度导致MDBK细胞周期阻滞在G0/G1期，S期和G2/M期细胞比例减少，表明细胞增殖受到抑制。血清浓度与细胞增殖关系随着血清浓度的降低，MDBK细胞的增殖速度逐渐减缓，表明血清中的生长因子对细胞生长具有促进作用。血清浓度对细胞生长影响

贴壁因子种类及作用01贴壁因子如纤连蛋白、层粘连蛋白等，在驯化过程中能促进MDBK细胞贴壁和伸展，有助于细胞适应悬浮环境。贴壁因子浓度优化02适当浓度的贴壁因子能提高MDBK细胞的贴壁效率和生长速度，但过高或过低的浓度都会对细胞生长产生不良影响。贴壁因子与其他添加剂的协同作用03贴壁因子与其他添加剂如生长因子、激素等协同作用，能进一步提高MDBK细胞的驯化效果。贴壁因子在驯化中作用机制

其他添加剂对驯化效果影响这些添加剂能保护MDBK细胞免受氧化应激和凋亡的影响，提高细胞的存活率和驯化成功率。其他添加剂如抗氧化剂、