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miRNAs表达异常与宫颈癌发生发展关系的研究进展

汇报时间：2024-01-24

汇报人：

引言

miRNAs表达异常与宫颈癌关系

实验方法与技术

实验结果与数据分析

讨论与结论

参考文献

引言

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宫颈癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，每年新发病例约50万例，死亡病例约30万例。

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宫颈癌发病率在发展中国家尤为突出，是女性癌症死亡的主要原因之一。

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宫颈癌的危害包括严重影响女性生殖健康、生活质量及预期寿命，给家庭和社会带来沉重负担。

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miRNAs是一类长度为20-24个核苷酸的非编码RNA，通过调控基因表达参与多种生物学过程。

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研究表明，miRNAs在宫颈癌发生发展中发挥重要作用，参与细胞增殖、凋亡、侵袭和转移等过程。

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miRNAs表达异常与宫颈癌的临床病理特征、预后和治疗效果密切相关。

miRNAs表达异常与宫颈癌关系

研究发现，多种miRNAs在宫颈癌组织中表达异常，如miR-21、miR-143、miR-145等，它们通过调节癌基因或抑癌基因的表达参与宫颈癌的发生。

miR-143和miR-145在宫颈癌组织中低表达，它们通过调节KRAS基因的表达抑制细胞增殖和迁移能力，从而抑制宫颈癌的发生。

miR-21在宫颈癌组织中高表达，通过抑制PTEN基因的表达促进细胞增殖和侵袭能力，从而促进宫颈癌的发生。

miRNAs不仅参与宫颈癌的发生，还与其发展密切相关。一些miRNAs可以通过调节细胞周期、凋亡和自噬等过程影响宫颈癌细胞的生长和存活。

miR-23a在宫颈癌组织中高表达，通过抑制FOXO3基因的表达促进细胞周期进展和细胞增殖，从而促进宫颈癌的发展。

miR-155在宫颈癌组织中高表达，通过抑制SOCS1基因的表达激活JAK/STAT信号通路，促进细胞增殖和侵袭能力，加速宫颈癌的发展。

一些miRNAs还可以调节宫颈癌细胞的代谢重编程，如miR-125b通过抑制P53基因的表达促进糖酵解过程，为宫颈癌细胞提供能量和生长优势。

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实验方法与技术

使用适当的培养基和条件，对宫颈癌细胞系进行培养，以获取足够的细胞数量进行实验。

细胞培养

利用脂质体或电穿孔等方法，将外源性miRNAs或miRNA抑制剂导入宫颈癌细胞中，以研究其对细胞生物学行为的影响。

细胞转染

VS

从宫颈癌组织或细胞中提取总RNA，使用特定的引物对目标miRNAs进行反转录。

qRT-PCR

采用实时荧光定量PCR技术，对目标miRNAs的表达水平进行检测和定量分析。

RNA提取

蛋白提取

从宫颈癌组织或细胞中提取总蛋白，使用特定的抗体对目标蛋白进行免疫沉淀。

Westernblot

将提取的蛋白进行SDS电泳分离，转移至PVDF膜上，使用特定的抗体进行杂交和显色反应，以检测目标蛋白的表达水平。

细胞增殖实验

采用MTT法、BrdU法等方法，检测转染外源性miRNAs或miRNA抑制剂后宫颈癌细胞的增殖能力变化。

利用流式细胞术、TUNEL法等方法，检测转染外源性miRNAs或miRNA抑制剂后宫颈癌细胞的凋亡情况。

采用划痕实验、Transwell小室等方法，研究转染外源性miRNAs或miRNA抑制剂后宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力变化。

通过Westernblot等方法，检测与细胞周期和细胞凋亡相关的蛋白表达水平变化，以探讨miRNAs对宫颈癌细胞周期和凋亡的调控机制。

细胞凋亡实验

细胞迁移和侵袭实验

细胞周期和细胞凋亡相关蛋白检测

实验结果与数据分析

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利用高通量测序技术对宫颈癌组织和正常宫颈组织中的miRNAs进行全面检测，获得miRNAs表达谱数据。

高通量测序技术

对测序数据进行质量评估、序列比对、表达量计算等分析，得到每个miRNA在样本中的表达情况。

数据分析方法

通过分析发现，宫颈癌组织和正常宫颈组织中的miRNAs表达谱存在显著差异，表现为一些miRNAs在宫颈癌组织中高表达，而另一些则低表达。

表达谱特征

功能注释与富集分析

对预测得到的靶基因进行功能注释和富集分析，揭示差异表达miRNAs在宫颈癌发生发展过程中的作用机制。

实验验证

通过细胞实验、动物实验等方法对预测的功能进行验证，进一步确认差异表达miRNAs在宫颈癌中的作用。

靶基因预测

利用生物信息学方法对差异表达的miRNAs进行靶基因预测，分析它们可能调控的靶基因及相关的生物学功能。

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对实验数据进行统计和可视化展示，包括差异表达miRNAs的表达情况、靶基因预测结果、功能注释与富集分析结果等。

数据统计与可视化

通过对数据的解读和挖掘，发现新的研究线索和潜在的靶点，为宫颈癌的诊断和治疗提供新的思路和方法。

数据解读与挖掘

将实验数据和分析结果共享给相关领域的研究人员，促进学术交流与合作