小鼠MDSC能够促进Th17细胞的分化和EAE.docVIP

小鼠CD11b+Gr-1+髓源性抑制细胞能够促进

Th17细胞的分化和实验性自身免疫性脑脊髓炎

髓源性抑制细胞（MDSCs）是近年来研究肿瘤介导的免疫抑制的焦点。然而，它在Th17细胞分化和自身免疫性疾病（例如多发性硬化）的发病机制中的作用尚未阐明。我们研究发现实验性自身免疫脑脊髓炎（EAE）小鼠的发病过程与CD11b+Gr-1+的MDSCs的高表达紧密相关，体外实验显示出T细胞的抑制功能。出乎意料的是，在Th17极化的条件下MDSCs能够高效地促进初始的CD4+T细胞前体变成Th17细胞。Th17细胞显著增加，IL-17A产生增高，还有孤核受体RORA和RORC的表达上调证明了这一点。机制研究表明IL-1β是MDSCs促进Th17细胞分化的主要介质，它依赖CD4+T细胞上的IL-1受体，而不是MDSCs。使用吉西他滨选择性地耗尽MDSCs可以显著的减轻EAE的病情（例如降低临床评分和髓磷脂损伤），这与淋巴组织和脊髓中Th17细胞和炎症性细胞因子（IL-17A和IL-1β）的减少相关。在吉西他滨治疗后转入MDSCs能够恢复EAE病情的发展。总之，我们首先证明MDSCs过度和延长的表达能够驱动Th17细胞的反应和EAE的发病。这些新的发现为MDSCs功能多向性提供了独特视角，帮助阐明Th17/IL-17依赖的自身免疫性疾病中MDSCs免疫抑制的失效。

CD4+的T细胞通过诱导关键的细胞因子和环境刺激下分化成许多亚群从而在免疫应答中发挥至关重要的作用。Th17细胞是新的被鉴定的炎症性CD+的T细胞亚群，它的特征是产生标志性的细胞因子IL-17（1，2）。体外小鼠CD4+的初始细胞分化成Th17细胞需要CD3-和CD28-介导的刺激以及IL-6或IL-21和TGF-β的存在（3）。人类CD4+的初始细胞分化成Th17细胞同样需要IL-6和TGF-β（3–7）。近年来研究表明IL-1β在人类和小鼠Th17细胞早期分化和Foxp3+T细胞转化成产生IL-17的细胞中发挥重要作用（8，9）。新的证据表明人类Th17细胞和IL-17与自身免疫性疾病的发病过程有关，包括多发性硬化（MS），类风湿性关节炎，炎症性肠病和银屑病（10）。

髓源性抑制细胞（MDSCs）是过去几年肿瘤研究的热点（11，12）。MDSCs最初被描述为荷瘤小鼠中具有免疫抑制功能的骨髓前体来源的未成熟的异种细胞。MDSCs的免疫抑制活性高度多向性，包括多种机制（13）。在小鼠中，MDSCs最具特征的是CD11b+Gr-1+的细胞，这群细胞根据功能不同又分为不同的亚群。人类MDSCs定义为Lin—HLA-DRlow/—CD33+（16），或CD11b+CD14—CD33+（17）。据报道，MDSCs能够使体内初始的CD4+变成表达Foxp3+的调节性T细胞（Tregs）（18，19）。MDSCs在肿瘤病程中减弱免疫反应的功能已有纪录（13，20）。在肿瘤中分支杆菌诱导的感染，MDSCs大量表达（21），MS小鼠模型（22）表明在炎症条件下，MDSCs具有潜在的调节功能。然而它们在炎症性自身免疫异常的病理过程中的特殊作用尚未阐明。

虽然MDSCs和Th17细胞代表两类主要的炎症性细胞，在条件伴随下与炎症相关，但是这两类细胞功能上的联系没有得到验证。实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）是研究人类多发性硬化（MS）具有代表性的良好的特征性小鼠模型，它通过给小鼠免疫致脑炎的髓磷脂抗原来诱导，即加了佐剂的髓磷脂少突神经胶质细胞糖蛋白（MOG）（23）。Th17细胞和IL-17在中枢神经系统慢性炎症的发病过程中的重要作用已有良好记录（24，26）。在这篇报道中，我们证明EAE小鼠的发病过程伴随着Th17细胞和MDSCs的增加。我们发现在IL-1β依赖的Th17极化条件的模式下，MDSCs能够促进Th17细胞的的分化和IL-17A大量产生。我们首先证明了在体内吉西他滨清除MDSCs后能够显著地减少Th17细胞，并且改善EAE的病情严重性。进一步研究表明在吉西他滨治疗后的小鼠转入MDSCs能够促进EAE病情的发展，它需要MDSC来源的IL-1β的产生。我们的数据确立了MDSCs在慢性炎症中调节小鼠Th17细胞反应的重要作用，提示这群细胞可以作为Th17细胞/IL-17介导的免疫病理学的独特靶点。

材料与方法

小鼠

从国家癌症学会（Bethesda，MD）获得的C57BL/6小鼠。从杰克逊实验室（BarHarbor，ME）获得的IL-1R1基因敲除小鼠（il1r12/2）和B6129F2小鼠。所有包含小鼠的实验和操作得到了弗吉利亚联邦大学实验动物管理和使用委员会的许可。

抗体和试剂

荧光染料结合的抗体，包括：BioLegend（SanDiego