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一、消毒与灭菌区分:
所谓灭菌就是杀死一切微生物,包含微生物营养体和芽孢。
消毒是指毁灭一切致病微生物(病原体)。
二、消毒与灭菌在发酵工业中应用
牛奶巴氏消毒法:80-95℃,10min
发酵培养基灭菌:121℃,20min
;三、灭菌方法:
1、干热灭菌:灼烧灭菌;加热方式有电热、红外线加热等;相对与湿热灭菌,干热要求时间长,温度高(普通160℃,2hr)
1)火焰焚烧法:接种环、试管口等
2)干烤法:利用热空气灭菌
使用方法:160℃,2小时
特点:因为空气传热穿透力差,菌体在脱水状态下不易杀死。所以温度高、时间长。;2、湿热灭菌:蒸气释放热量,使微生物蛋白质变性。
特点:温度低、时间短、灭菌效果好
原因:
1)菌体内含水量越高,则凝固温度越低;
2)蒸汽冷凝会放出潜热;
3)饱和水蒸汽穿透力强;
4)湿热易破坏细胞内蛋白质大分子稳定
性,主要破坏氢键结构。;湿热灭菌优点:
1)蒸气起源易,低价无毒;
2)蒸气穿透力强灭菌彻底;
3)蒸气冷凝释放热量;
4)蒸气易输送,易调整,易管理。
湿热灭菌缺点:
1)设备费用高;
2)不能用于怕受潮物料;;3、射线灭菌法:
1)电离辐射:χ、γ、β射线。
原理:引发水和其它物质电离,产生游离基,破坏DNA,从而造成细胞损伤。
特点;穿透力强,无专一性,对全部生物都有杀伤作用。
适用:菌种诱变。
;2)非电离辐射(紫外线)
方法:在波长265-266nm处,杀菌力最强。
原理:
(1)作用于DNA,使同链DNA相邻嘧啶间形成嘧啶二聚体,引发DNA结构变形,妨碍正常碱基配对,从而造成菌变异或死亡。(光复活酶可修复)
(2)有氧时产生过氧化氢,强氧化杀菌。
适用:空气、水消毒杀菌(紫外灯)。
特点:穿透力差。;3.过滤灭菌法;4、化学药品灭菌;(2)醇类:
乙醇:70-75%杀菌效率最高
机理:具脱水作用,能穿透菌体进入蛋白质分子肽链间隙,使蛋白质变性或脱水沉淀,造成微生物死亡。
无水乙醇:表面蛋白凝固,保护膜,杀菌力差
甲醇可使眼睛失明,故不宜做消毒剂;其它醇因不溶于水,普通不用。
;(3)醛类:
甲醛:
机理:蛋白质烷??剂;
应用:福尔马林(40%);
10%甲醛熏蒸,用于空气灭菌。
(4)表面活性剂:
可降低表面张力效应物质。
机理:使菌体细胞膜破损;使菌体蛋白质变性。
种类:洗必泰、新洁尔灭等
特点:快速、彻底、效率高
;(5)氧化剂类:
机理:破坏蛋白质巯基,强氧化剂可破坏蛋白质氨基与酚羟基
碘酒7gI:5gKI,溶于100ml95%乙醇。
1%碘酒10min可杀死芽孢杆菌和部分真菌,
并使流感病毒灭活。
漂白粉(氯化钙与次氯酸钙混合物);(6)重金属及其化合物:
全部重金属盐Cu、As、Ag、Hg等对微生物都有毒性。
机理:
1)可与酶蛋白-SH基结合,使酶失活;
2)易与带阴电荷菌体蛋白吸附,使之变性沉淀。
应用:波尔多液、红汞、硝酸银等。
特点:简便。但使用应慎重,预防在体内积累。;(7)pH杀菌作用
酸:蛋白质变性
无机酸:杀菌力与H+浓度成正比。
有机酸:与不电离部分成正比,故有时有机酸灭菌效果无机酸,分子杀菌力大于离子。
碱:强碱造成蛋白质、核酸大分子变
性、水解,使菌死亡。
;2)抗代谢药品;3)?抗生素;抗生素作用机理:
1)对细胞壁形成有抑制作用;(如:青霉素)
2)影响细胞膜功效;(如:多粘菌素)
3)抑制蛋白质合成;(如:绿霉素、链霉素)
4)干扰核酸代谢;(如:利福霉素、灰黄霉素)
抗药性:变异、适应、进化
原因:药品无效;药品被修饰;
R质粒(药品抗性基因);二、湿热灭菌原理;2.微生物热致死动力学:对数残留定律。
菌体是一个复杂高分子体系,其受热被杀死,主要原因是高温能使蛋白质变性,这种反应属于单分子反应(一级反应),所以,杂菌在一定温度下受热死亡过程可用单分子反应历程加以描述。
-dN/dt=k*N
式中dN/dt:表示灭菌过程中某瞬间活菌降低速率
N:表示表示灭菌过程中某瞬间活菌数
K:表示灭菌过程中菌体死亡速度常数;上式积分形式为:
t=(2.303/k)×lnN0/Nt
式中——N0,Nt:分别表示灭菌前、灭菌后培养基中菌体浓度(个/ml)
灭菌时间t取决于污染程度N0、灭菌程度Nt与灭菌速度常数K
灭菌程度:对于Nt,假如取Nt=0,那么,t=∞
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