培养基灭菌医学知识专家讲座.pptx

一、消毒与灭菌区分：

所谓灭菌就是杀死一切微生物，包含微生物营养体和芽孢。

消毒是指毁灭一切致病微生物（病原体）。

二、消毒与灭菌在发酵工业中应用

牛奶巴氏消毒法：80-95℃，10min

发酵培养基灭菌:121℃,20min

;三、灭菌方法：

1、干热灭菌：灼烧灭菌；加热方式有电热、红外线加热等；相对与湿热灭菌，干热要求时间长，温度高（普通160℃，2hr）

1）火焰焚烧法：接种环、试管口等

2）干烤法：利用热空气灭菌

使用方法：160℃,2小时

特点：因为空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死。所以温度高、时间长。;2、湿热灭菌：蒸气释放热量，使微生物蛋白质变性。

特点：温度低、时间短、灭菌效果好

原因：

1)菌体内含水量越高，则凝固温度越低；

2)蒸汽冷凝会放出潜热；

3)饱和水蒸汽穿透力强；

4)湿热易破坏细胞内蛋白质大分子稳定

性，主要破坏氢键结构。;湿热灭菌优点：

1）蒸气起源易，低价无毒；

2）蒸气穿透力强灭菌彻底；

3）蒸气冷凝释放热量；

4）蒸气易输送，易调整，易管理。

湿热灭菌缺点：

1）设备费用高；

2）不能用于怕受潮物料；;3、射线灭菌法：

1）电离辐射：χ、γ、β射线。

原理：引发水和其它物质电离，产生游离基，破坏DNA，从而造成细胞损伤。

特点；穿透力强，无专一性，对全部生物都有杀伤作用。

适用：菌种诱变。

;2）非电离辐射（紫外线）

方法：在波长265-266nm处，杀菌力最强。

原理：

（1）作用于DNA，使同链DNA相邻嘧啶间形成嘧啶二聚体，引发DNA结构变形，妨碍正常碱基配对，从而造成菌变异或死亡。（光复活酶可修复）

（2）有氧时产生过氧化氢，强氧化杀菌。

适用：空气、水消毒杀菌（紫外灯）。

特点：穿透力差。;3.过滤灭菌法;4、化学药品灭菌;（2）醇类：

乙醇：70-75%杀菌效率最高

机理：具脱水作用，能穿透菌体进入蛋白质分子肽链间隙，使蛋白质变性或脱水沉淀，造成微生物死亡。

无水乙醇：表面蛋白凝固，保护膜，杀菌力差

甲醇可使眼睛失明，故不宜做消毒剂；其它醇因不溶于水，普通不用。

;（3）醛类：

甲醛：

机理：蛋白质烷??剂；

应用：福尔马林（40%）；

10%甲醛熏蒸，用于空气灭菌。

（4）表面活性剂：

可降低表面张力效应物质。

机理：使菌体细胞膜破损；使菌体蛋白质变性。

种类：洗必泰、新洁尔灭等

特点：快速、彻底、效率高

;（5）氧化剂类：

机理：破坏蛋白质巯基，强氧化剂可破坏蛋白质氨基与酚羟基

碘酒7gI：5gKI，溶于100ml95%乙醇。

1%碘酒10min可杀死芽孢杆菌和部分真菌，

并使流感病毒灭活。

漂白粉（氯化钙与次氯酸钙混合物）;（6）重金属及其化合物：

全部重金属盐Cu、As、Ag、Hg等对微生物都有毒性。

机理：

1）可与酶蛋白-SH基结合，使酶失活；

2）易与带阴电荷菌体蛋白吸附，使之变性沉淀。

应用：波尔多液、红汞、硝酸银等。

特点：简便。但使用应慎重，预防在体内积累。;（7）pH杀菌作用

酸:蛋白质变性

无机酸:杀菌力与H+浓度成正比。

有机酸:与不电离部分成正比,故有时有机酸灭菌效果无机酸，分子杀菌力大于离子。

碱:强碱造成蛋白质、核酸大分子变

性、水解，使菌死亡。

;2）抗代谢药品;3）?抗生素;抗生素作用机理：

1）对细胞壁形成有抑制作用；（如：青霉素）

2）影响细胞膜功效；（如：多粘菌素）

3）抑制蛋白质合成；（如：绿霉素、链霉素）

4）干扰核酸代谢；（如：利福霉素、灰黄霉素）

抗药性：变异、适应、进化

原因：药品无效；药品被修饰；

R质粒（药品抗性基因）;二、湿热灭菌原理;2.微生物热致死动力学：对数残留定律。

菌体是一个复杂高分子体系，其受热被杀死，主要原因是高温能使蛋白质变性，这种反应属于单分子反应（一级反应），所以，杂菌在一定温度下受热死亡过程可用单分子反应历程加以描述。

-dN/dt=k*N

式中dN/dt：表示灭菌过程中某瞬间活菌降低速率

N：表示表示灭菌过程中某瞬间活菌数

K：表示灭菌过程中菌体死亡速度常数;上式积分形式为：

t=（2.303/k）×lnN0/Nt

式中——N0，Nt：分别表示灭菌前、灭菌后培养基中菌体浓度（个/ml）

灭菌时间t取决于污染程度N0、灭菌程度Nt与灭菌速度常数K

灭菌程度：对于Nt，假如取Nt=0，那么，t=∞