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石油污染土壤微生物群落分布特征

摘要：采用高通量测序法研究东营某炼油厂不同污染程度的土壤中细菌、真菌和古菌

的群落结构，分析石油污染对土壤微生物群落结构的影响。结果表明：微生物群落可操作

分类单元(OTU)数量随着油污土壤油含量的增加先增多后减少；Beta多样性与土壤石油污

染程度有一定的关系；受污染程度相近的土壤样品，微生物群落结构的相似度较高。细菌、

真菌、古菌群落中相对丰度最大的分别为变形菌门(Proteobacteria)、子囊菌门

(Ascoycota)和奇古菌门(Thauarchaeota)，分别为44.8%～79.5%、54.4%～83.2%

和28.3%～93.1%。属水平群落聚类分析结果显示，随着土壤油含量增加，真菌踝节菌属

(Talaroyces)的相对丰度由0增加到31.6%，细菌寡养单胞菌(Stenotrophoonas)由

0.1%增加到1.9%，古菌甲烷八叠球菌属(Methanosarcina)由5.8%增加到37.8%。微生

物群落结构与土壤中烃类组分含量相关性分析发现，真菌炭疽菌属(Colletotrichu)、细

菌节杆菌属(Arthrobacter)、古菌盐红菌属(Halorubru)与烷烃含量呈显著正相关性，细

菌甲基杆菌属(Methylobacteriu)、古菌甲烷八叠球菌属(Methanosarcina)与芳香烃含

量呈显著正相关性。

关键词：油污土壤；微生物群落结构；高通量测序；生物修复

石油是一种重要的能源，在促进经济发展的同时也带来了大量的环境问题。在石油开

采、储运和生产加工等过程中，不可避免地会对土壤、地表水及地下水造成不同程度的污

染。其中，在油田和油井钻凿过程中对周围土壤的污染、石油开采过程中形成的落地油、

输油管路的渗漏等，是土壤石油污染的主要途径[1]。石油污染物可以影响土壤的微生物群

落结构[2-10]。微生物与环境的相互作用是微生物在各种不同环境中生存和繁殖的关键。

其中，土壤细菌群落是土壤微生物中数目最多、分布最广且成分最丰富的微生物之一，土

壤真菌是土壤微生物的主要成员，古菌是土壤中存在的一种特殊的生命形式。它们共同作

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为土壤生态系统的重要组成部分，在碳循环、氮循环等生物地球化学进程中起着不可替代

的作用。同时，土壤的理化性质和生物学特征也被土壤微生物通过不同途径改变，包括有

机质的合成分解、污染物降解、养分固定与释放等[11-17]。

目前，对土壤微生物群落结构的研究可采用变性梯度凝胶电泳、实时荧光定量PC、

荧光原位杂交、序列标签标记的高通量测序以及宏基因组等技术。其中，高通量测序技术

具有高准确度、低成本等优势[18-19]。因此，笔者采用高通量测序技术对不同污染程度的

石油污染土壤样品中细菌、真菌以及古菌群落结构进行研究，探究微生物群落分布及其与

石油污染土壤性质之间的关系，为深入认识油污土壤微生物群落分布特征以及油污土壤的

高效生物修复技术的建立提供理论基础。

1实验部分

1.1原料和试剂

实验试剂：牛肉浸膏、胰蛋白胨、琼脂粉，B，国药集团化学试剂有限公司产品；氯

化钠、无水硫酸钠、四氯化碳、碳酸氢钠、正己烷，A，上海泰坦科技股份有限公司产品；

硅酸镁、氯化钾、重铬酸钾、浓硫酸、邻菲罗啉、硫酸亚铁、钼锑抗、硼酸、甲基红、溴

甲酚绿、浓盐酸、高锰酸钾、硅胶，A，国药集团化学试剂有限公司产品；二氯甲烷、氢

氧化钠，A，西陇科学股份有限公司产品。

油污土壤样品：油污土壤采集地点位于东营某炼油厂(东经118°5′，北纬38°15′)的油

罐区(YGQ)、污油场(WYC)、垃圾场(LJC)3个地点，各采集0～20c上层土壤样品和

20～50c下层土壤样品，分别记为YGQ0-20、YGQ20-50、WYC0-20、WYC20-50、

LJC0-20、L