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分光光度法参比溶液
紫外分光光度法是根据物质的吸收光谱,来研究物质的成分、
结构和物质间相互作用的有效手段。紫外分光光度计可以在紫
外可见光区任意选择不同波长的光。紫外分光光度计的使用及
校准需要注意哪些问题呢?跟小析姐一起来看看吧、
物质的吸收光谱就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的
某些特定波长的光能量,相应地发生了分子振动能级跃迁和电
子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结
构,其吸收光能量的情况也就不会相同,因此,每种物质就有
其特有的、固定的吸收光谱曲线,可根据吸收光谱上的某些特
征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量。
紫外分光光度计用途
1、检定物质根据吸收光谱图上的一些特征吸收,特别是最大
吸收波长λ-max和摩尔吸收系数ε是检定物质的常用物理参
数。这在药物分析上就有着很广泛的应用。在国内外的药典中,
已将众多的药物紫外吸收光谱的最大吸收波长和吸收系数载
入其中,为药物分析提供了很好的手段。
2、与标准物及标准图谱对照将分析样品和标准样品以相同浓
度配制在同一溶剂中,在同一条件下分别测定紫外可见吸收光
谱。若两者是同一物质,则两者的光谱图应完全一致。如果没
有标样,也可以和现成的标准谱图对照进行比较。这种方法
要求仪器准确,精密度高,且测定条件要相同。
3、比较最大吸收波长吸收系数的一致性
4、纯度检验
5、推测化合物的分子结构
6、氢键强度的测定实验证明,不同的极性溶剂产生氢键的强
度也不同,这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢
键强度,以确定选择哪一种溶剂。
7、络合物组成及稳定常数的测定:
8、反应动力学研究
9、在有机分析中的应用有机分析是一门研究有机化合物的分
离、鉴别及组成结构测定的科学,它是在有机化学和分析化学
的基础上发展起来的综合性学科。
紫外分光光度计使用注意事项
1、温度和湿度是影响仪器性能的重要因素:
他们可以引起机械部件的锈蚀,使金属镜面的光洁度下降,引
起仪器机械部分的误差或性能下降;造成光学部件如光栅、反
射镜、聚焦镜等的铝膜锈蚀,产生光能不足、杂散光、噪声等,
甚至仪器停止工作,从而影响仪器寿命。维护保养时应定期加
以校正。使用紫外分光光度计应具备四季恒湿的仪器室,配置
恒温设备,特别是地处南方地区的实验室。
2、环境中的尘埃和腐蚀性气体亦可以影响机械系统的灵活性、
降低各种限位开关、按键、光电偶合器的可靠性,也是造成必
须学部件铝膜锈蚀的原因之一:因此,使用紫外分光光度计必
须定期清洁,保障环境和仪器室内卫生条件,防尘。
3、除尘紫外分光光度计仪器使用一定周期后,内部会积累一
定量的尘埃,最好由维修工程师或在工程师指导下定期开启仪
器外罩对内部进行除尘工作:
同时,将各发热元件的散热器重新紧固,对光学盒的密封窗口
进行清洁,必要时对光路进行校准,对机械部分进行清洁和必
要的润滑。最后,恢复原状,再进行一些必要的检测、调校与
记录。分析仪器工作者要懂得仪器的日常维护和对主要技术指
标的简易测试方法,自己经常对仪器进行维护和测试,以保证
仪器工作在最佳状态。
紫外可见分光光度计详细操作流程及校准方法
1、紫外可见分光光度计光度测量
在模式选择屏幕中选择<1.Photometric光度>选项,将显示
参数配置屏幕;
用GOTOWL键设定测量波长;
按F2键设定进样控制;
按START/STOP键时,测量开始,显示测量屏幕;
如需做空白校正,应在测量前先设置空白样品,然后,按
AUTO-ZERO键,将测量值置为OABS(100%);
2、紫外可见分光光度计校正开机预热10分钟足矣;
放入黑块和标样(没有的自己配),关闭盖子;
校0;
把灯光对着黑块,把透光度调0;
把灯光对标样,将吸光度调到100%;
3、参比溶液介绍参比溶液又称空白溶液。测量时用作比较的、
不含被测物质但其基体尽可能与试样溶液相似的溶液。通常,
用参比溶液扫描的曲线应是一条平坦的直线。有时,基体中,
虽不含被测物质,但含有别的物质,这时必须保证其不影响测
试。经常碰到的是试剂空白中含有被测物质,此时必须经过纯
化将其除去。否则将影响测定结果。
4、紫外可见分光光度计使用注意事项①开机前应先预热15分
钟,然后开机自检;
②湿度要控制在75%左右,温度在5
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