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磷矿废水中高效聚磷菌的筛选

近年来我国水体富营养化越来越严重，水体受到污染不仅破坏了环境与动植物的生存也影响了人们的生活和人们的工农业发展。而水体富营养化都与水中的磷含量剧增有关，所以除去水中的磷对治理水体富营养化特别重要，这也是个社会非常关注的问题。我校的南湖水体污染特别严重是我校的美中不足。

关键词：生物去磷 聚磷菌 筛选 环境污染 污水处理

目前城市污水处理主要使用生物除磷，它是利用聚磷菌一类的微生物从水中摄取磷，并将磷存于体内，在水低形成高磷的污泥，达到了去磷防水体富营养化的效果。聚磷菌是生物除磷的决定生物，而聚磷菌的工作受到环境的影响，如氧浓度，PH值，温度等，且不同的聚磷菌的聚磷能力不同，所以要想达到高去磷的效果就必须筛选出聚磷效率高的菌种

.实验材料与方法

主要的的仪器设备

摇床，超净工作台，全自动高压灭菌锅，培养箱，电子天平，酸度计，离心机,可见分光光度计，培养皿20个，细菌过滤器，移液枪（100ul和1000ul），量筒（10ml和50ml各一个)，锥形瓶（150ml,250ml和500ml），草酸铵结晶紫，革兰氏碘液，95%的酒精，石碳酸复染红，显微镜，载玻片及盖玻片。

主要的试剂

微生物分离纯化用的试剂均是国产分析纯，主要有牛肉膏，蛋白胨，琼脂，乙酸钠，磷酸氢二钾，硫酸镁，硫酸亚铁，氢氧化钠硫酸铵，钼酸钾，抗坏血酸，酒石酸锑钾，磷酸二氢钾，氢氧化钾过硫酸钾，MOPSHighPurityGrade,Tricine,X--Pi.

样本采集

磷矿废水

培养基及溶液

（1)YG培养液：酵母侵膏1g,葡萄糖1g，K2HPO40.3gKH2PO40.25g七水硫酸镁0.2g,

蒸馏水1000ml.

（2)MOPS培养基:100ml的10*MOPS8.370g,tricine0.717g,30ml的去离子水，10mol/LKOH调PH到7.4.总体积44ml.0.01mol/L,硫酸亚铁1ml，按下列加：氯化铵（1.9mol/L)5ml,硫酸钾（0.276mol/L)1ml,二水氯化钙0.02mol/L)0.025ml,六水氯化镁（2.5mol/L)0.21ml,NaCl(5mol/L)10ml,微量元素混合液0.02ml,葡萄糖0.1g,)取25ml置于两个500ml的三角瓶中，向一个三角瓶加0.0087gK2HPO4，成为限磷培养基。另一个加0.1732gK2HPO4成为过磷培养基。两瓶分别加离子水后用细菌过滤器过滤分别装于灭菌的150ml三角瓶中。

（3)LB培养基：酵母清膏5g蛋白胨10g，氯化钠5g，水1000ml，pH7.0~~~7.2

实验方法

1.聚磷菌的筛选：

（1)聚磷菌的分离，纯化与保存。将水样充分摇匀后，用移液枪取0.5ml水样于4.5ml的无

菌水中，震荡混匀，依次制成0.1，0.010.001.0001.00001不同浓度的菌液，从各菌液中取0.1ml加入YG平板中，涂布均匀，每个浓度三个重复，于28摄氏度条件下培养2天，挑出形态不同的菌落，在YG平板上多次划线纯化，挑取单菌落转接到YG斜面上，于28摄氏度培养两天，4摄氏度冰箱保存。

（2）蓝白斑筛选;采用蓝白斑选法进行聚磷菌的初筛。方法为;将在YG平板上分离纯化的菌种到MOPS限磷，过磷平板中，28摄氏度培养2天，观察白斑生长情况。

菌体磷含量的测定：

将筛选好的菌种接在液体培养基的试管里30摄氏度过夜，取25ml加到250ml的锥形瓶中于30摄氏度在摇床中培养，不同时间段生长期测提菌体的含磷量及磷浓度。方法：

取不同生长期的50ml的菌液到离心管中，以12000r/min离心5min,用无菌水溶解，再离心，重复3次的湿菌体，于105℃烘干测菌体干重。

将称重后的菌体无菌水溶解后再用过硫酸钾进行消解，按总磷测定方法测菌体磷含量。

上清液磷含量测量：在称干重时同时取第一次离心的上清液，取上清液按总磷的测定方法测磷浓度。记录培养液磷浓度随培养时间的变化。

2.革兰氏鉴定

涂片：在载玻片滴一滴水用接种环以无菌操作挑取上述筛选好的菌体于水滴中室温自然干燥

初染：草酸铵结晶紫染色液1到2分钟。倾取染液，自来水慢洗到玻片无色。

媒染：加一到两滴革兰氏碘液染1~~3分钟水洗。

脱水：酒精一到两滴30秒到1分钟，水洗。

复染：石碳酸复染红10到20秒，水洗。

镜检：待玻片干后先用低倍镜观察，再用油镜观察。紫色为阳性，红色为阴性

实验结果与分析