聚合酶链式反应技术和应用专家讲座.pptx

2024/7/20ZhejiangProvincialKeyLabofMedicalGenetics1聚合酶链式反应技术及应用分子生物学第9章检验医学院生命科学学院聚合酶链式反应技术和应用第1页

2024/7/20ZhejiangProvincialKeyLabofMedicalGenetics2聚合酶链式反应（polymerasechainreaction,PCR）技术是生命科学界重大创造，是生物技术领域中最主要四项生物技术（即细胞融合技术、分子克隆术、蛋白工程技术和基因扩增技术）之一。PCR最大特点，是能将微量DNA大幅增加。经过体外（试管内）扩增，能够将目标基因（或靶基因）片段百万倍放大，从而到达极大地提升核酸分子检测灵敏度，理论上其检测灵敏度能够到达一个细胞、甚至一个分子水平。聚合酶链式反应技术和应用第2页

2024/7/20ZhejiangProvincialKeyLabofMedicalGenetics3PCR发展简史PCR创造人，普通公认是凯利﹒穆利斯（K.Mullis,在Cetus企业工作期间，创造了PCR。1983年4月穆利斯萌发了PCR构想;1985关于PCR文章首次由Cetus企业Saiki等人在Science上发表;1987当年7月Cetus企业在美国取得PCR基本技术专利同意,并于当年11月推出了第一个PCR试剂产品及第一台热循环仪；1989Science报道了耐热性DNA多聚酶Taq酶发觉,预示着分子时代到来；1990Cetus科学家D.Gelfand和S.Stoffel创造了纯化TaqDNA多聚酶方法；1991TaqMan技术发表；九十年代中期PCR临床应用在国内全方面展开；1998年实时荧光PCR技术开始在中国较广泛应用于临床检测。聚合酶链式反应技术和应用第3页

2024/7/20ZhejiangProvincialKeyLabofMedicalGenetics4引物引物Mullis构思DNA聚合酶DNA聚合酶特定DNA片段聚合酶链式反应技术和应用第4页

2024/7/20ZhejiangProvincialKeyLabofMedicalGenetics5KaryB.MullisTheUnusualOriginofthePolymeraseChainReaction1989年美国《Science》杂志列PCR为十余项重大科学创造之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。聚合酶链式反应技术和应用第5页

2024/7/20ZhejiangProvincialKeyLabofMedicalGenetics6PCR应用研究基因克隆，DNA测序，分析突变诊疗细菌、病毒、寄生虫检测，诊疗人类基因组工程遗传图谱构建，DNA测序，表示图谱法医犯罪现场标本分析肿瘤各种肿瘤检测其它……聚合酶链式反应技术和应用第6页

2024/7/20ZhejiangProvincialKeyLabofMedicalGenetics7PCR技术基本原理是DNA半保留复制，在模板DNA、引物和四种dNTP存在条件下，依赖于DNA聚合酶酶促反应。在体内，DNA复制是周期性，所以基因扩增数量有限；PCR技术在体外利用人工合成引物，再加上DNA聚合酶和一些适当底物和因子，经过对温度控制，使DNA不停位于变性、复性和合成循环中，到达扩增DNA目标。2.PCR基本原理聚合酶链式反应技术和应用第7页

2024/7/20ZhejiangProvincialKeyLabofMedicalGenetics8模板DNA94℃变性55℃退火72℃引物延伸第二次循环模板变性退火延伸图6-1PCR原理示意图聚合酶链式反应技术和应用第8页

2024/7/20ZhejiangProvincialKeyLabofMedicalGenetics91234522557294时间（min）温度（℃）PCR基本原理适温延伸3高温变性1低温退火2重复1~3步25~30轮目标DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性DNA变性形成2条单链子链延伸DNA加倍聚合酶链式反应技术和应用第9页

2024/7/20ZhejiangProvincialKeyLabofMedicalGenetics10PCR产物生成曲线扩增产物循环次数指数扩增期扩增平台期聚合酶链式反应技术和应用第10页

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