牛奶中糠氨酸的快速测定方法 拉曼光谱法.pdfVIP

牛奶中糠氨酸的快速测定方法拉曼光谱法

1范围

本文件规定了利用拉曼光谱法快速检测牛奶中糠氨酸的原理、试剂和材料、仪器和设备、测定步骤、

结果计算及检测方法。

本文件适用于生鲜牛乳、巴氏杀菌乳、UHT高温灭菌乳中糠氨酸的快速检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

牛乳试样经盐酸水解后测定蛋白质含量，水解液经稀释后直接用于测定。样品中的糠氨酸分子与表

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面增强试剂混合后，分子吸附在表面增强纳米颗粒上，其拉曼散射信号可增强10倍以上，使用便携式

激光拉曼检测仪可自动判别其特征峰并定性检测出糠氨酸。通过对测定的拉曼谱图进行基线调整和归一

化处理，应用外标法可完成牛乳样本中糠氨酸的定量分析。

5试剂和材料

以下所有试剂，除特别注明者外，均为分析纯试剂，实验用水应符合GB/T6682中规定的一级水要

求。

5.1糠氨酸标准品

CAS19746-33-9，纯度大于99.5%。

5.2表面增强试剂

金纳米溶胶。

5.3无机盐离子团聚剂

1.0M盐酸溶液。

5.4糠氨酸标准储备溶液

将糠氨酸标准品按标准品证书提供的肽纯度系数（NetPeptideContent）换算，用3mol/L盐酸溶液

配置成标准储备液。-20℃条件下可储存24个月。

示例：糠氨酸标准品证书上标注肽纯度系数为69.1%，则称取7.24mg糠氨酸标准品，用3.0mol/L盐

酸溶液溶解并定容至10.0mL，标准储备液的浓度为500.0mg/L。

5.5柠檬酸钠溶液

准确称取1g柠檬酸钠，溶于水中，定容至100mL，柠檬酸钠溶液的浓度为1%。

6仪器和设备

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6.1激光拉曼光谱仪

仪器参考条件：激光波长785nm，激光功率200mW，积分时间5秒，平均次数2次。

6.2微波消解仪

微波消解仪配有聚四氟乙烯消解内罐。

6.3微波消解管

微波消解管的量程为30mL。

6.4分析天平

分析天平的感量为0.001g，0.0001g。

6.5移液枪

移液枪的量程为5mL。

6.6冷藏冰箱

储藏温度范围为4℃~10℃。

7测定步骤

测定步骤包括采样、样品制备、定性检测、定量检测。

7.1采样

用于检测的巴氏杀菌乳和运输温度为2℃~6℃，UHT灭菌乳储存和运输温度不高于25℃。

按GB/T10111的规定取不少于250.0mL样品，样品不应受到破坏或者再转运和储藏期间发生变化。

监督抽查或仲裁检验等采样应到加工厂抽取成品库的代销产品，1周内测定。

7.2样品制备

7.2.1金纳米粒子的合成

准确量取2.424mL浓度为1%的HAuCl溶液加入50.0mL水中，加热煮沸。再加入1.5mL浓度为1%

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的柠檬酸钠溶液，继续加热30min，冷却至室温，即可使用。金纳米粒子的扫描电镜图和紫外吸收图参

见附录A中图A1。

7.2.2试样水解液的制备

称量1.000g（准确至0.001g）牛奶样品，倒入聚四氟乙烯消解管中，加入10.0mL浓度为8N的盐酸

溶液，酸水解牛奶样品，同时做试剂空白实验，盖消解管专用盖后将消解管安装至支架上，放入微波消

解仪，按表１中的升温程序进行微波消解，消解完成后冷却至室温，定容至25.0mL，过0.22μm水相滤

膜，取滤液供上机测定。

表1微波消解程序

升温时间/min消解温度/℃保持时间/min

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