基因识别靶标鉴定药物发现中核酶翻译.pptxVIP

核酶在基因的鉴定

药物靶点验证和发现

—药学121宋润江作者：JonE.Chatterton,XiuyuanHuandFlossieWong-Staal期刊名：DrugDiscoveryToday影响因子：5.964SCI分区：中科院杂志分区药学分类下的?2?区期刊时间：No.1February2004

引言现代基因技术使基因表达数据和疾病现象的快速关联更为容易，从而寻找潜在的药物靶标。这些靶标的认定需要直接证据，而且不仅仅是互作，表达水平和表现型的关系。在鉴定过程中，特定基因沉默（采用反义核酶和siRNA）已经表现出是鉴定过程的一种有效方法。尽管siRNA可能使其它基因沉默方法的失效，最新的核酶技术进展应该能够使这种方法在靶标鉴定工具箱留有余地。而且，已经证明了结合核酶库鉴定功能相关基因的价值巨大。

在快速基因组时代，通过生物信息学，表达程序概要分析和其它的工具，研究者快速鉴别蛋白药物靶标，以此联连基因表达与疾病的现象。然而，这些蛋白靶标的确认需要证据：观察到基因表达在疾病表现型上确确实实的不同处。更者，用来鉴定的蛋白靶标表达量少，要求有一种快速的技术可以广泛应用于大多数基因和细胞种类中。Knockout老鼠在鉴定过程中起到重要作用；然而，它们的产物即贵也很耗时，所以在早期的靶标鉴定过程中排除这种方法。相反地，在人工培养的细胞中，mRNA水平中的特异性基因沉默是一种经济的，快速的技术，可以通过HTS策略调整。这种方法成为鉴定前期过程的重要方法。

图1所示。初级和二级结构(a)

锤头状和(b)发夹状核酶(蓝色)绑定到靶mRNA

(绿色)。H=A、C或U;N=任何核苷酸。箭头表示裂解位点。黑色圆点代表沃森-克里克碱基对。

核酶在靶标中的鉴定随着研究者们在核酶技术中采用上述的最新改进，靶标鉴定中核酶的有效性一定会有所提高。然而，对于已提出的治疗癌症、关节炎、病毒感染和其它疾病的药物靶标，更常规的核酶技术应用已经有重要了解。例如，几个研究小组已经采用核酶来提高诱导细胞凋亡试剂的敏感度。Choi等[19]采用一种腺病毒带菌体来传递CMV启动子驱动表达盒，使核酶抵抗生存素。生存素是蛋白的细胞凋亡家庭的一种抑制剂，也与控制细胞分裂和凋亡有关。在MCF-7细胞传感中，核酶导致mRNA减少75%，结果使自发的细胞凋亡增加了2倍，葡糖苷敏感度增加了约三倍。Orlandi等[40]采用CMV启动子核酶在DU145细胞中表现出抗蛋白激酶Cα。核酶导致蛋白激酶Cα增加了40-50%，顺氯氨铂感应细胞凋亡增加了约三倍。Collis等[41]还采用CMV启动子来促使表达核酶抗RAD51链转移酶，即组成同源重组修复通道。在LNCaP细胞中，核酶导致RAD51蛋白减少45-80%，离子化辐射敏感度减少36-68%。

核酶与siRNA的比较

1.核酸酶的敏感2.siRNA识别序列长于传统的发夹核酶3.与核酶相比，siRNAs最大的优处在于沉默效率的区域4.siRNA链的敏感型和非敏感型都能集合进入RNA-引起的沉默复合物和互补mRNAs的退化

结论

最新技术进展显著地增加核酶效果和简化操作。核酶现在能通过设计裂解任何靶标位点，不管是不是二级结构。此外，控制核酶表达与其mRNA靶标的共同局限和提高合成核酶的稳定性，也增强它们的裂解能力。将这些技术改进的应用，会增加核酶在靶标鉴定中的效率。更者，在治疗性靶标基因的鉴定中，核酶比siRNA具有独特的优势。因此，相比siRNA,核酶仍是功能基因组学中一种重要的工具。