微柱凝胶免疫检测技术博迅产品操作03版课件.ppt

;反响原理

微柱凝胶免疫反响的本质是红细胞凝集试验，也可称之微柱凝胶血凝试验〔MicrocolumnGelHeamagglutinationAssay，MGHA〕。

在微柱凝胶管中，红细胞和相应抗体结合后，形成红细胞凝集团块。在一定离心力下，该凝集团块位于胶外表或胶中；而红细胞未和相应抗体结合，仍为分散的红细胞，在同样的离心力下，红细胞沉降到微柱管尖底部。;;产品操作;检测标本的准备

1.标本要求用EDTA抗凝管采集的新鲜血〔如陈旧血需设阴性对照〕。

2.抗凝血样标本要上清澄清。如有纤毛状、浑浊、乳糜、溶血、脂肪等状，应再次洗涤离心。为防止纤维蛋白影响红细胞沉降，建议使用红细胞稀释液。

3.血辫血样须放置试管中离心处理，确保血清澄清微黄。必要时需洗涤。

4.在18-25℃条件下平衡30分钟，防止冷凝集。

红细胞悬液的制备

1.将红细胞配制为0.8%的悬液，最高浓度不要超过1%。如:取8μl压积红细胞，参加到1ml的红细胞稀释液〔抗人球蛋白试验要求用低离子液配置红细胞悬液〕中，配制出的红细胞悬液浓度大约为0.8%。

2.外观检查呈均匀淡红色，无血块、无絮状物〔如有纤维蛋白需去除〕。;

;4+红细胞复合物〔凝集〕位于凝胶外表

3+大局部红细胞复合物位于凝胶外表，少局部位于凝胶中部

2+大局部红细胞复合物位于凝胶中部，少局部位于凝胶中上部

1+红细胞复合物位于凝胶中下部

±与同一卡中阴性管结果对照，如与阴性结果有差异，即为±

-红细胞完全沉积在凝胶管尖底部

完全溶血凝胶和液体无凝集或未凝集的红细胞，液体出现透明清澈红色

不完全溶血残留红细胞在胶外表、胶中或胶底部，液体出现透明清澈红色

混合凝集红细胞复合物位于凝胶外表和凝胶底部;三、标准操作规程;1、ABO、RhD血型定型检测卡〔单克隆抗体〕

操作步骤：

1〕将准备好的检测卡做好标记；

2〕将待检者血浆分别参加5-6管中，各50μl；

;3〕将待检者0.8%红细胞悬液分别参加1-4管中，各50μl；

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5〕离心5分钟〔900rpm2分钟，1500rpm3分钟〕；

6〕结果判读。

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3〕离心5分钟〔900rpm2分钟，1500rpm3分钟〕；

4〕结果判读。

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3、Rh血型抗原检测卡〔单克隆抗体〕

操作步骤:

1〕将准备好的检测卡做好标记；

2〕将待检者0.8%红细胞悬液分别参加1—6管中，各50μl；;

3〕离心5分钟〔900rpm2分钟，1500rpm3分钟〕；

4〕结果判读。

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4、抗人球蛋白检测卡—不规那么抗体筛检

操作步骤：

1〕将准备好的检测卡做好标记；

2〕将0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ筛检红细胞各50μl分别参加对应的微管中;

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3〕将待检者血浆各50μl分别参加Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ微管中；

4〕37℃孵育15分钟；

;5〕离心5分钟〔900rpm2分钟，1500rpm3分钟〕；

6〕结果判读。

;5、抗人球蛋白检测卡—交叉配血试验

操作步骤：

1〕将准备好的检测卡做好标记；

2〕将供血者0.8%红细胞悬液与受血者血浆各50μl先后参加主侧管中；

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3〕将受血者0.8%红细胞悬液与供血者血浆各50μl先后参加次侧管中；

4〕37℃孵育15分钟；

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5〕离心5分钟〔900rpm2分钟，1500rpm3分钟〕；

6〕结果判读。

;;操作步骤：

1〕将准备好的检测卡做好标记；

2〕将0.8%待检者和阴性对照〔健康男性O型〕红细胞悬液各50μl分别参加微管中；

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3〕离心5分钟〔900rpm2分钟，1500rpm3分钟〕；

4〕结果判读。

;7.抗人球蛋白检测卡—母体IgG抗体效价检测

操作步骤

1〕在试管中分别参加200μl母体血清和200μl2-ME应用液，然后置于37℃水浴30-60分钟。以充分破坏血清中IgM类抗体；;

2〕取6只干净试管，分别做好标记。将处理后的血清做倍比稀释；

;3〕将准备好的HDN母体IgG抗体效价检测卡做好标记，在所有孔中分别参加50μl父亲〔或父亲同型〕的0.8%红细胞悬液〔ABO血型系统IgG血型抗体〕或在所有孔中分别参加50μl标准O型0.8%红细胞悬液〔测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体〕；

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4〕依次将50μl倍比稀释血清分别参加对应孔中；

;5〕37℃孵育15分钟；

6〕离心5分钟〔900rpm2分钟，1500