SNT 1961.19-2013 出口食品过敏原成分检测 第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T1961.19—2013

出口食品过敏原成分检测

第19部分：实时荧光PCR方法

检测大豆成分

Detectionofallergencomponentsinfoodforexport—Part19:RealtimePCRmethodfordetectingsoybeancomponents

2013-03-01发布2013-09-16实施

中华人

中华人民共和国

SN/T1961.19—2013

前言

SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分：——第1部分：酶联免疫法检测花生成分；

——第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分；

——第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分；——第4部分：实时荧光PCR方法检测腰果成分；

——第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分；———第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分；

——第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分；——第8部分：实时荧光PCR方法检测榛果成分；

——第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分；

——第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分；——第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分；

第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分：——第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分；———第14部分：实时荧光PCR方法检测鱼成分；

——第15部分：实时荧光PCR方法检测芹菜成分；——第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分；——第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分；——第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分；——第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第19部分。

本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。

本部分主要起草人：张舒亚、郑秋月、徐杨、曹际娟、李妮、张佳谊、吕蓉、陈颖、徐宝梁。

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SN/T1961.19—2013

出口食品过敏原成分检测

第19部分：实时荧光PCR方法

检测大豆成分

1范围

SN/T1961的本部分规定了食品中过敏原大豆成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原大豆成分的定性检测。

本部分所规定方法的最低检出限(LOD)为0.01%(质量分数)。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

过敏原allergen

又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原。

3.2

大豆soybean

别名黄豆、青豆、黑豆，属豆科(Leguminosae)大豆属(Glycine),学名：Glycinemar。

3.3

实时荧光PCRrealtimePCR

在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。3.4

Ct值cyclethreshold

每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。

4方法提要

样品经研磨后，提取DNA,以DNA为模板，采用大豆的管家基因(Lectin,植物凝集素基因)特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象，判断样品中是否存在过敏原大豆成分。

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SN/T1961.19—2013

5试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。

5.1大豆成分扩增引物和探针、内参照(真核生物成分)引物和探针详见表1。

表1试验用引物和探针

名称

序列(5-3)

目的基因

内参照5’端引物

内参照3端引物

内参照探针

TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTAAATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT

FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCC