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利用多重PCR技术快速检测4种水稻病原细菌
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莫瑾王哲周慧平朱宏建朱水芳廖晓兰
摘要：对水稻中多种病原细菌的检测，使用常规方法往往耗时耗力，而多重PCR可以更加高效地进行多种细菌的检测。根据水稻细菌性谷枯病菌gyrB基因，水稻细菌性叶鞘褐腐病菌PfsI/Rquorumsensing位点以及水稻细菌性条斑病菌和水稻白叶枯病菌含铁细胞接受因子基因设计引物，建立4种水稻病菌的多重PCR检测方法，对方法进行特异性和灵敏度测试，并对采自不同地区的水稻样本進行检测。结果显示，多重PCR方法能同步地快速检测出水稻细菌性谷枯病菌、水稻细菌性叶鞘褐腐病菌、水稻细菌性条斑病菌或水稻白叶枯病菌，检测灵敏度达到103cfu/mL的菌液浓度，利用该方法对我国不同地区的58份水稻种子进行检测，其中17个样本检测出水稻细菌性条斑病菌或水稻白叶枯病菌，未检测到水稻细菌性谷枯病菌和水稻细菌性叶鞘褐腐病菌。
关键词：多重PCR;水稻病原细菌;检测
中图分类号：
S435.111
文献标识码：A
DOI：10.16688/j.zwbh.2020205
AmultiplexPCRmethodforrapiddetectionoffourricepathogenicbacteria
MOJin1，2，WANGZhe2，ZHOUHuiping2，ZHUHongjian1，ZHUShuifang1，LIAOXiaolan1*
（1.CollegeofPlantProtection，HunanAgriculturalUniversity，Changsha410128，China;
2.TechnologyCenterofChangshaCustoms，Changsha410004，China）
Abstract
MultiplexPCRisanefficientandsimplemethodtodetectavarietyofpathogenicbacteriainriceatthesametime.AmultiplexPCRdetectionmethodwasestablishedforfourricepathogenicbacteria，andtheprimersweredesignedbasedonthegyrBgeneofBurkholderiaglumae，thePfsI/RquorumsensinglocusofPseudomonasfuscovaginaeandtheiron-containingcell-receivingfactorgenesofXanthomonasoryzaepv.oryzaeandX.oryzaepv.oryzicola.ThespecificityandsensitivityofthemultiplexPCRmethodwerevalidated，andricesamplesfromdifferentregionsweretestedusingthismethod.TheresultsshowedthatthemultiplexPCRmethodcanfastandaccuratelydetectfourricepathogenicbacteria.Thedetectabilityofthismethodreached103cfu/mLinthebacterialsolution.Among58ricesamplesfromdifferentregions，neitherB.glumaenorP.fuscovaginaewasdetected，whileX.oryzaepv.oryzaeorX.oryzaepv.oryzicolawerepositivein17samples.
Keywords
multiplexPCR;ricepathogenicbacteria;detection
水稻细菌性谷枯病（病原菌：Burkholderiaglumae）[12]、水稻细菌性叶鞘褐腐病（病原菌：Pseudomonasfuscovaginae）[34]、水稻白叶枯病（病原菌：Xanthomonasoryzaepv.oryzae）和水稻细菌性条斑病（病原菌：X.oryzaepv.oryzicola）[56]
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