免疫组化技术（病理检验技术课件）.pptx

病理检验技术

;免疫组化技术;免疫荧光组织化学技术

;所不同的是免疫荧光染色技术所用的抗体标记物是荧光素而不是酶,不需要显色剂和显色反应,通过激发抗原-抗体结合物上结合的荧光素发出可见荧光,用荧光显微镜观察这些可见荧光来确定是否有抗原表达。眼睛在暗视场观察抗原部位发出的荧光比在明视场观察阳性结果的颜色要敏感。

;;;间接法

用已知抗体检测未知抗原时,先用特异性抗体(第一抗体,简称“一抗”)与相应抗原结合,再用荧光素标记的抗特异性抗体(第二抗体,简称“二抗”)与特异性抗体结合,在荧光显微镜下可见抗原抗体反应部位呈现明亮的特异性荧光。

用已知抗原检测未知抗体时,先用特异性抗原与细胞或组织内抗体反应,再用此抗原的特异性荧光抗体与结合在细胞内抗体上的抗原相结合,抗原夹在细胞抗体与荧光抗体之间。

;;;病理检验技术

;免疫组化技术;免疫荧光组织化学技术

;一、组织切片

（二）组织切片厚度的要求

组织切片的厚度为4~5um；

肾穿刺组织切片要薄,3~4um。

切片太厚,除了在染色过程中容易脱片和细胞重叠影响观察诊断外,还会造成激发光过多消耗在标本下面,标本上面照射不足等,造成上下不均匀的现象。

;二、组织细胞固定

作冷冻切片的组织不用固定,经冷冻切片后切片用冷丙酮(4℃)固定10分钟；细胞涂片固定和冷冻切片固定相同。