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产品说明书

产品名称：FireflyRenillaDualLuciferaseAssayKit（双荧光素酶报告基因检测试剂盒）

产品货号：BN16075

产品规格：100T，1000T

产品内容：

组分100T1000T

A.5×PassiveLuciferaseLysisBuffer10mL100mL

B.FireflyLuciferaseAssayBuffer10mL100mL

C.D-Luciferin2mg20mg

D.RenillaLuciferaseAssayBuffer10mL100mL

E.50×Coelenterazine200µL2mL

储存条件后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低

-80℃保存。将C组分溶解到B组分后，该混合液不来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。Renilla

可反复冻融，建议进行小批量分装。RenillaLuciferaseAssayluciferase相对更多地被用作转染效率的内参，以消除细胞

solution（D+E）应新鲜配制，当天使用。有效期见外包数量和转染效率的差异。

装。萤火虫荧光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在

ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化

产品介绍成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧

FireflyRenillaDualLuciferaseAssayKit（双荧光素酶光(bioluminescence)。海肾荧光素酶是一种分子量约为36kD

报告基因检测试剂盒）为双报告基因检测提供有效的手段。的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化coelenterazine氧

在DLR检测中，萤火虫（Firefly）荧光素酶和海肾（Renilla）化成coelenteramide，在coelenterazine氧化的过程中也会发

荧光素酶的活性可在单个样品中依次检测。首先是先以荧光出生物荧光。生物荧光可以通过化学发光仪(luminometer)

素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(Fireflyluciferase)，或液闪测定仪进行测定。该试剂盒具有检测迅速、灵敏度高、

后以肠腔素(coelenterazine)为底物来检测海肾荧光素酶检测范围广，无细胞内源活性干扰等特点。

(Renillaluciferase)，并且在后续加入海肾荧光素酶底物时，

同时加入抑制萤火虫荧光素酶催化luciferin发光的物质，使使用方法

后续检测仅仅检测到海肾荧光素酶的活性，实现双荧光素酶1.细胞裂解

报告基因检测。通过荧光素酶和其底物这一生物发光体系，1.1将转入报告基因的细胞中的培养基移除，加PBS轻轻

可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因洗涤两次（贴壁细胞可直接进行此操作，悬浮细胞要离心收

的转录调控元件或5启动子区克隆在luciferase的上游，或集细胞）。按如下方案加入1×LysisBuffer(用无菌水按4:1

把3-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因稀释A组分)，然后将培养板放在微型震荡器上室温震荡

(reportergene)质粒，然后转染细胞，用适当药物等处理细胞15min，充分裂解细胞。

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